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本发明属于甾醇生物转化技术领域,具体涉及一种混菌发酵生物转化植物甾醇制备甾体药物中间体11α?羟基?雄甾?4?烯?3,17?二酮的方法。本发明将分枝杆菌TCCC11028M3接入含有植物甾醇和转化介质环糊精的发酵培养基中,培养24h后接种赭曲霉CICC41473孢子液继续进行转化。本发明利用混菌发酵实现了由植物甾醇到11α?羟基?雄甾?4?烯?3,17?二酮的一步转化。此方法提高了产物的生成率,缩短了转化周期,简化操作,节约成本,适用于甾体化合物生物转化的生产。