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本发明涉及一种耐温型酵母及其分离培养方法和应用。所述耐温型酵母命名为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)YP005A菌株,保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏时间为2019年2月25日,保藏编号为CGMCCNo.17256,地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号。其耐温性能很好,在较低温和较高温度下均能够保持良好的发酵性能,在较低温和较高温度下其发酵过程中CO2失重量均保持在较高水平,同时,该酿酒酵母在较低温和较高温度下均具有突出的产乙醇能力和酯化能力。而且该菌种能够有效提高浓香型中高温大曲的质量,从而用于浓香型白酒的生产对提高原酒的优质品率及出酒率具有重要的意义。