（B版，浙江选考专用）高考生物总复习 专题25 微生物的利用课件-人教版高三全册生物课件.ppt

专题25微生物的利用考点微生物的培养和利用基础知识一、微生物的实验室培养1.培养基(1)概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求配制出供其生长繁殖的营养基质。(2)成分:一般都含有碳源、氮源、水和无机盐还需要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。2.无菌技术3.实验操作牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备:计算→称量→溶化→灭菌→③倒平板。二、细菌的分离方法:划线分离法和涂布分离法1.划线分离法(1)方法:用接种环蘸菌液后在含有④固体培养基的平板上划线使聚集的菌种分散到培养基的表面。每个⑤菌落就是一个细菌产生的后代。(2)应用:用于基因工程的大肠杆菌等工程菌可以用划线分离法获得产物表达能力高的菌株。工程菌的质粒中通常有⑥抗性基因(如抗氨苄青霉素基因)如在培养基中加入一定量的氨苄青霉素由于非工程菌和其他杂菌都没有抗性基因所以在划线后只有存在抗性基因的工程菌能生存下来。2.涂布分离法:先将培养的菌液⑦稀释通常稀释10-7~10-5倍然后取0.1mL稀释度不同的稀释菌液加在培养皿的固体培养基上用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养在适当的稀释度下可产生相互分开的⑧菌落。3.二者比较:划线分离法方法⑨简单;涂布分离法单菌落更易分开但操作⑩复杂。三、大肠杆菌的培养和分离1.大肠杆菌:革兰氏 阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。2.细菌的繁殖:以 分裂的方式繁殖分裂速度很快。3.细菌的扩大培养:用 LB液体培养基划线分离用 LB固体平面培养基。4.大肠杆菌的分离操作技术最常用的方法是划线分离法其操作步骤是:a.培养基灭菌:将刚配制好的50mLLB液体培养基和50mLLB固体培养基分别装入两个250mL的三角瓶中加上封口膜用 高压锅进行灭菌。b.倒平板:在酒精灯火焰旁将固体培养基分别倒在4个培养皿中使培养基铺满培养皿底部待凝使之形成平面。c.接种扩大培养:靠近酒精灯火焰将大肠杆菌接种到三角瓶的 液体培养基中三角瓶在37℃每分钟200转的摇床中振荡培养12h。d.划线分离:将摇床上培养12h的菌液在固体培养基的平板上 连续划线然后将盖好的培养皿倒置放在37℃恒温培养箱中进行培养12~24h后可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落表明菌已被分离。e.菌种保存:在无菌操作下将单菌落用接种环取出再用 划线法接种在空白斜面上在37℃下培养24h后置于4℃冰箱中保存。四、分离以尿素为氮源的微生物1.实验原理:不同微生物利用氮源种类 不同。有一些细菌含有脲酶通过降解尿素作为其生长的氮源。尿素在脲酶的降解下产生 NH3使培养基的pH由原来的中性变为 碱性于是培养基中的酚红由红黄色变成 红色。2.实验步骤:(1)制备培养基:在60℃左右时将两个三角瓶中已灭菌的LB固体培养基和 尿素固体培养基在酒精灯旁分别倒入两个培养皿中摇匀后平放至凝固。(2)制备细菌悬液:在无菌条件下将1g土样加到有99mL无菌水的三角瓶中振荡10min即成10-2土壤稀释液依此方法制备10-3、10-4和10-5的土壤稀释液。(3)涂布法分离:取10-4和10-5的土壤稀释液各0.1mL分别加到有LB培养基和尿素培养基的培养皿中用通过 灼烧法灭菌的玻璃刮刀将菌液涂布到整个平面上。(4)培养和观察:在37℃恒温箱中培养24~48h观察 菌落数。3.预测本实验的结果:LB全营养固体培养基上的菌落 多而杂;尿素固体培养基上的菌落 少而纯一定时间内菌落周围出现 红色区域。用浓度为10-4和10-5的土壤稀释液接种更容易形成单菌落的是 10-5土壤稀释液。重点难点一、无菌技术的知识归纳1.灭菌原因:为了获得纯净的培养物关键是防止外来杂菌的污染。2.无菌操作的条件:(1)各种器皿必须是无菌的;(2)各种培养基必须是无菌的;(3)细菌转移操作的过程必须是无菌的。灭菌方法4.避免被杂菌污染的方法(1)注意灭菌操作原则灭菌彻底降低环境污染概率手和实验服要清洁减少操作时间对污染源的改善考虑周到。(2)注意微生物生长条件如pH、渗透压、温度等。细菌喜中性偏碱的环境喜蛋白质丰富的营养物质喜37℃的温度;而霉菌喜中性偏酸的环境喜糖类丰富的营养物质喜25℃~30℃的温度。因此可以根据不同微生物的“喜好”来减少污染。(2)在灼烧接种环之后要等其冷却后再进行划线以免接种环温度太高杀死菌种。(3)在做第二次以及其后的划线操作时要从上一次划线的末端开始划线。每次划线后线条末端细菌的数目比线条起始处