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本发明公开了一种测定兰科药材中多种活性成分的方法,属于中药材活性成分检测技术领域。该方法包括以下步骤:(1)分别吸取对照品溶液和待测兰科药材样品溶液注入超高效液相色谱?串联质谱仪,测定相应的保留时间、离子丰度比和峰面积,待检测成分是根据对照品溶液对照图谱的保留时间和离子丰度比确定;(2)通过外标法计算,即得兰科药材溶液中活性成分的含量。采用本发明的测定方法,可以检测兰科药材中的16种活性成分,16种活性成分在较宽的质量浓度范围内线性良好,16种活性成分的检出限在0.006mg/kg?1.2mg/kg之间,定量限0.02mg/kg?4mg/kg之间,检出限和定量限均较低;16种活性成分的RSD≤10%,回收率在79.90%?103.80%。