蚂蟥的特征图谱及其构建方法与应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115902077A(43)申请公布日2023.04.04(21)申请号202211271229.X(22)申请日2022.10.17(71)申请人广东一方制药有限公司地址528000广东省佛山市南海区里水镇旗峰工业开发区(72)发明人邱韵静潘礼业钟春琳童培珍杨晓东杨丽庞伟林晗李国卫陈向东孙冬梅(74)专利代理机构广州三环专利商标代理有限公司44202专利代理师李素兰(51)Int.Cl.G01N30/86(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/34(2006.01)权利要求书2页说明书11页附图17页(54)发明名称蚂蟥的特征图谱及其构建方法与应用(57)摘要本发明公开了一种蚂蟥的特征图谱的构建方法，包括：制备参照物溶液，所述参照物溶液包括对照药材溶液和对照品溶液，所述对照品溶液中包括尿嘧啶对照品、次黄嘌呤对照品、黄嘌呤对照品、水蛭胺C羧基衍生物对照品、水蛭胺B对照品；制备供试品溶液；取预设量的所述参照物溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以甲酸为流动相B进行梯度洗脱，建立特征图谱。本发明可为蚂蟥药材及蚂蟥标准汤剂的质量控制提供数据基础，有效保证蚂蟥药材、标准汤剂产品质量的稳定性和可控性。CN115902077ACN115902077A权利要求书1/2页1.一种蚂蟥的特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：制备参照物溶液，所述参照物溶液包括对照药材溶液和对照品溶液，所述对照品溶液中包括尿嘧啶对照品、次黄嘌呤对照品、黄嘌呤对照品、水蛭胺C羧基衍生物对照品、水蛭胺B对照品；制备供试品溶液；取预设量的所述参照物溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以甲酸为流动相B进行梯度洗脱，建立特征图谱。2.如权利要求1所述的蚂蟥的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱按下述程序进行：0min～12min，流动相A为0，流动相B为100％；12min～15min，流动相A从0→1％，流动相B从100％→99％；15min～27min，流动相A从1％→8％，流动相B从99％→92％；27min～35min，流动相A从8％→11％，流动相B从92％→89％；35min～45min，流动相A从11％→12％，流动相B从89％→88％；45min～55min，流动相A从12％→21％，流动相B从88％→79％；55min～65min，流动相A从21％→30％，流动相B从79％→70％。3.如权利要求1所述的蚂蟥的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述甲酸的体积浓度为0.005％～0.015％。4.如权利要求1所述的蚂蟥的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述对照品溶液和供试品溶液的预设量为4μL～6μL；所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为4μm～6μm，柱温为25℃～32℃，洗脱流速为0.5mL/min～1.5mL/min；所述液相色谱仪的紫外检测波长为250nm～255nm。5.如权利要求4所述的蚂蟥的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm，柱温为30℃；所述液相色谱仪的紫外检测波长为254nm。6.如权利要求1所述的蚂蟥的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述供试品溶液采用下述方法制得：取蚂蟥样品，制粉后过45目～55目筛网，然后称取0.1g～1.2g与30％～70％的甲醇混合，所述甲醇的加入量为20mL～30mL，超声处理20min～40min后，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，制得供试品溶液。7.如权利要求1所述的蚂蟥的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述对照品溶液按照下述方法制得：取所述尿嘧啶对照品、次黄嘌呤对照品、黄嘌呤对照品、水蛭胺C羧基衍生物对照品、水蛭胺B对照品，加甲醇制成每1mL含所述尿嘧啶对照品、次黄嘌呤对照品、黄嘌呤对照品、水蛭胺C羧基衍生物对照品、水蛭胺B对照品各20μg的混合溶液，制得所述对照品溶液；所述对照药材溶液采用下述方法制得：取蚂蟥药材样品，制粉后过45目～55目筛网，然后称取0.1g～1.2g与30％～70％的甲2CN115902077A权利要求书2/2页醇混合，所述甲醇的加入量为20mL～30mL，超声处理20min～40min后，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，制得对照药材溶液。8.如权利要求6或7所述的蚂蟥的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述超声处理的功率为250W～350W，频率为35kHz～45kHz。9.如权利要求1所述的蚂蟥的特征图谱的构建方法，其特征