昆布产品HPLC特征图谱的构建方法及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115963196A(43)申请公布日2023.04.14(21)申请号202211540962.7G01N30/74(2006.01)(22)申请日2022.12.02G01N30/86(2006.01)(71)申请人天地恒一制药股份有限公司地址410331湖南省长沙市长沙国家生物产业基地康天路109号(72)发明人索成林邱志杰谢晓庆王国栋陈玉萍罗回富黎叶青彭凌云程雪清(74)专利代理机构北京精金石知识产权代理有限公司11470专利代理师尉月丽(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/34(2006.01)权利要求书1页说明书21页附图13页(54)发明名称昆布产品HPLC特征图谱的构建方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种昆布产品HPLC特征图谱的构建方法及其应用，所述构建方法包括以下步骤；S1、昆布供试品溶液的制备；S2、参照物溶液的制备；S3、对照品溶液的制备；S4、高效液相色谱测定：吸取步骤S1制备的昆布供试品溶液、步骤S2制备的参照溶液和步骤S3制备的对照品溶液注入高效液相色谱，得到HPLC特征图谱；所述HPLC特征图谱中至少包括尿苷峰、腺苷峰、尿嘧啶峰和鸟苷峰。应用本发明的构建方法可同时针对尿苷、鸟苷、尿嘧啶和腺苷的含量进行定量控制，可以有效控制和较全面的评价昆布产品的质量。CN115963196ACN115963196A权利要求书1/1页1.昆布产品HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤；S1、昆布供试品溶液的制备；S2、参照物溶液的制备；S3、对照品溶液的制备；S4、高效液相色谱测定：吸取步骤S1制备的昆布供试品溶液、步骤S2制备的参照溶液和步骤S3制备的对照品溶液注入高效液相色谱，得到HPLC特征图谱；所述HPLC特征图谱中至少包括尿苷峰、腺苷峰、尿嘧啶峰和鸟苷峰。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S1中所述昆布供试品包括昆布药材、昆布饮片、昆布标准汤剂、昆布干膏粉或昆布配方颗粒。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述昆布供试品溶液的制备为：称取昆布供试品，加入体积百分数10％的甲醇制备成昆布供试品溶液。4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S2中所述参照物溶液的制备为：取昆布对照药材，加体积百分数10％的甲醇制备成参照物溶液；步骤S3中所述对照品溶液的制备为：取尿苷、腺苷、尿嘧啶及鸟苷对照品适量，加体积百分数10％的甲醇制备成混合溶液，作为对照品溶液。5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S4中所述高效液相色谱的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比3：2的乙腈和甲醇混合液为流动相A，体积百分数0.1％的磷酸溶液为流动相B进行梯度洗脱。6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱的条件如下：7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S4中所述高效液相色谱的色谱条件为：流速为每分钟0.7‑0.9mL/min；柱温为23‑27℃；检测波长为230‑320nm。8.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S4采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件生成由6个特征峰构成的对照特征图谱，其中，2号峰为尿嘧啶峰，4号峰为尿苷峰，5号峰为腺苷峰，6号峰为鸟苷峰，1号峰和3号峰为共有峰。9.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，以腺苷峰为S峰，各特征峰与S峰的相对保留时间的比值为：0.37‑峰1、0.39‑峰2、0.52‑峰3、0.87‑峰4、1.32‑峰6。10.根据权利要求1‑9任一项所述的构建方法在昆布产品质量控制中的应用。2CN115963196A说明书1/21页昆布产品HPLC特征图谱的构建方法及其应用技术领域[0001]本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种昆布产品HPLC特征图谱的构建方法及其应用。背景技术[0002]昆布为海带科植物海带LaminariajaponicaAresch.或翅藻科植物昆布EckloniakuromeOkam.的干燥叶状体，其性寒，味咸，具有消痰软坚散结、利水消肿的功效，用于治疗瘿瘤、瘰疬、睾丸肿痛、痰饮水肿。[0003]作为一味应用历史悠久的药食两用中药，前人对昆布的化学组成、药理作用和临床应用开展了许多研究。2020年版中国药典一部收载的昆布质量标准中仅测定了碘和多糖的含量，不能实现对昆布产品整体质量进行准确描述和评价。李蓉首次建立的海带HPLC参考指纹图谱可用于海带药材的真伪鉴别(参见李蓉，唐旭利，张敏，李国强，王长云，管华诗.海洋药用生物系列HPLC化学指纹图谱研究Ⅰ.海带药材的HPLC化学指纹图谱[J].中国海洋大学学报(自然科学版)，20