一种用于支气管败血波氏杆菌实时荧光定量PCR方法的引物.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN104480219A(43)申请公布日2015.04.01(21)申请号201510033460.9(22)申请日2015.01.22(71)申请人新疆天康畜牧生物技术股份有限公司地址830032新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市高新区北区蓝天路221号(72)发明人何海郝成武贺笋李延涛(74)专利代理机构乌鲁木齐新科联知识产权代理有限公司65107代理人王志刚(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12Q1/04(2006.01)C12N15/11(2006.01)C12R1/01(2006.01)权利要求书1页说明书3页序列表1页附图1页(54)发明名称一种用于支气管败血波氏杆菌实时荧光定量PCR方法的引物(57)摘要本发明属于生物技术领域，特别涉及一种用于支气管败血波氏杆菌实时荧光定量PCR方法的引物，所述的引物包括上、下游引物，具体如下：上游引物：5’‐GCGCCTGCCCTATCCCG‐3’如SEQIDNO.1所示；下游引物：5’‐GCCGCCCATTCGTAACATCG‐3’如SEQIDNO.2所示。本发明利用荧光定量PCR方法替代普通PCR的方法筛选试猪，利用荧光定量PCR溶解曲线吸收峰的特异性原理对样本进行检测，使试猪筛选更准确。CN104480219ACN104480219A权利要求书1/1页1.一种用于支气管败血波氏杆菌实时荧光定量PCR方法的引物，其特征在于，所述的引物包括上、下游引物，具体如下：上游引物：5’‐GCGCCTGCCCTATCCCG‐3’如SEQIDNO.1所示；下游引物：5’‐GCCGCCCATTCGTAACATCG‐3’如SEQIDNO.2所示。2CN104480219A说明书1/3页一种用于支气管败血波氏杆菌实时荧光定量PCR方法的引物技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，特别涉及一种用于支气管败血波氏杆菌实时荧光定量PCR方法的引物。背景技术[0002]常规测定试猪中支气管败血波氏杆菌(Bordetellabronchiseptica，Bb)抗原的方法是将从试猪身上采集的鼻拭子进行培养，再利用培养基分离鉴定，或者通过普通的PCR方法进行检测。其中，培养基分离鉴定法在实际操作中非常繁复，且易受杂菌干扰影响；而普通PCR方法相较于传统的分离鉴定检测法，虽然较为灵敏快捷，但是对目标菌在菌液中的含量以及杂菌数量等方面要求较为严格，且有可能出现假阴性与假阳性等结果，使筛选出的萎缩性鼻炎阴性猪或者感染猪出现偏差；同时，这种方法耗时费力。[0003]本发明的目的在于：通过设计高特异性引物，采用实时荧光定量PCR方法，测定试猪鼻拭子中的支气管败血性波氏杆菌抗原含量，从而替代普通PCR的方法筛选试猪；并利用荧光定量PCR溶解曲线吸收峰的特异性原理对样本进行检测，使试猪筛选更准确和高效。发明内容[0004]本发明的目的在于：设计一对高特异性荧光定量PCR检测引物，便于优化支气管败血波氏杆菌抗原检测，简化待测样本制备工作，从而提高抗原检测效率。[0005]本发明的目的是这样实现的：一种用于支气管败血波氏杆菌实时荧光定量PCR方法的引物，所述的引物包括上、下游引物，具体如下：上游引物：5’‐GCGCCTGCCCTATCCCG‐3’如SEQIDNO.1所示；下游引物：5’‐GCCGCCCATTCGTAACATCG‐3’如SEQIDNO.2所示。[0006]有益效果：本发明采用的高特异引物，使用荧光定量PCR法，在细菌含量在10时即可准确的检测出来，且不受杂菌干扰影响；采用的实时荧光定量PCR法检测猪萎缩性鼻炎支气管败血波氏杆菌抗原，具有方便、准确、高灵敏度的特点。附图说明[0007]下面结合附图对本发明作进一步说明。[0008]图1为普通PCR对Bb抗原检测图；附图1说明：如图1所示：1:108CFUBb菌体；2:107CFUBb菌体；3:106CFUBb菌体；4:105CFUBb菌体；5:104CFUBb菌体；6:103CFUBb菌体；7:102CFUBb菌体；8:10CFUBb菌体；9:1CFUBb菌体；10：Maker2000；11：阳性对照。具体实施方式[0009]实施例1、一种用于支气管败血波氏杆菌实时荧光定量PCR方法的引物，所述的引3CN104480219A说明书2/3页物包括上、下游引物，具体如下：上游引物：5’‐GCGCCTGCCCTATCCCG‐3’如SEQIDNO.1所示；下游引物：5’‐GCCGCCCATTCGTAACATCG‐3’如SEQIDNO.2所示。[0010]具体实践验证：荧光定量PCR检测猪萎缩性鼻炎病原体抗原（支气管败血波氏杆菌）的方法步骤：1抗原检测1.1制作鼻拭子将竹签一头缠