一种突变体及其构建方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115896051A(43)申请公布日2023.04.04(21)申请号202210736334.XC12N15/70(2006.01)(22)申请日2020.12.30C12N15/10(2006.01)C12N1/21(2006.01)(62)分案原申请数据C12R1/19(2006.01)202011624067.42020.12.30(71)申请人中国科学院苏州生物医学工程技术研究所地址215163江苏省苏州市高新区科技城科灵路88号(72)发明人江晶洁马富强陆泽林(74)专利代理机构深圳市科进知识产权代理事务所(普通合伙)44316专利代理师孟洁(51)Int.Cl.C12N9/06(2006.01)权利要求书2页说明书8页C12N15/53(2006.01)序列表（电子公布）附图1页(54)发明名称一种突变体及其构建方法和应用(57)摘要本发明提供了一种突变体，其氨基酸序列为SEQIDNO.1上发生下列位点的突变：Y128R；Y128R、G34D；Y128R、S38R；Y128R、Q332K；Y128R、G34D、S38R；Y128R、G34D、Q332K；Y128R、S38R、Q332K；Y128R、G34D、S38R、Q332K。本发明提供的精氨酸氧化酶突变体与野生型精氨酸氧化酶相比，突变体热稳定性更好。通过本发明所提供的构建方法得到的精氨酸氧化酶突变体热稳定性更好，在较高的温度下氧化L‑精氨酸时，仍然表现出优良的催化活性，在L‑精氨酸生物传感器检测及生物化工等领域具有较高的应用潜力。CN115896051ACN115896051A权利要求书1/2页1.一种突变体，其特征在于，其氨基酸序列为SEQIDNO.1上发生下列位点的突变：Y128R；Y128R、G34D；Y128R、S38R；Y128R、Q332K；Y128R、G34D、S38R；Y128R、G34D、Q332K；Y128R、S38R、Q332K；Y128R、G34D、S38R、Q332K。2.根据权利要求1所述突变体，其特征在于，所述突变体对应的氨基酸序列分别为SEQIDNO.4、SEQIDNO.7、SEQIDNO.9、SEQIDNO.11、SEQIDNO.12、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15、SEQIDNO.16。3.一种编码权利要求2所述突变体的基因序列，其特征在于，所述基因序列被配置为SEQIDNO.19、SEQIDNO.22、SEQIDNO.24、SEQIDNO.26、SEQIDNO.27、SEQIDNO.29、SEQIDNO.30、SEQIDNO.31中的任一种，其中：编码突变位点为Y128R的突变体的核酸序列为SEQIDNO.19；编码突变位点为G34D和Y128R的突变体的核酸序列为SEQIDNO.22；编码突变位点为S38R和Y128R的突变体的核酸序列为SEQIDNO.24；编码突变位点为Y128R和Q332K的突变体的核酸序列为SEQIDNO.26；编码突变位点为G34D、S38R和Y128R的突变体的精氨酸氧化酶突变体的核酸序列为SEQIDNO.27；编码突变位点为S38R、Y128R和Q332K的突变体的核酸序列为SEQIDNO.29；编码突变位点为G34D、Y128R和Q332K的突变体的核酸序列为SEQIDNO.30；编码突变位点为G34D、S38R、Y128R和Q332K的突变体的核酸序列为SEQIDNO.31。4.根据权利要求3所述基因序列，其特征在于，所述突变位点G34D的扩增引物对的核酸序列为SEQIDNO.32和SEQIDNO.33。5.根据权利要求3所述基因序列，其特征在于，所述突变位点S38R的扩增引物对的核酸序列为SEQIDNO.34和SEQIDNO.35。6.根据权利要求3所述基因序列，其特征在于，所述突变位点Y128R的扩增引物对的核酸序列为SEQIDNO.36和SEQIDNO.37。7.根据权利要求3所述基因序列，其特征在于，所述突变位点Q332K的扩增引物对的核酸序列为SEQIDNO.38和SEQIDNO.39。8.一种可溶性蛋白，其特征在于，其被配置为包括权利要求1～2任一所述突变体。9.一种固定化酶，其特征在于，其被配置为包括权利要求1～2任一所述突变体。10.一种重组工程细胞，其特征在于，其被配置为包括权利要求1～2任一所述突变体的编码序列。11.一种重组载体，其特征在于，其被配置为包括权利要求1～2任一所述突变体的编码序列。12.权利要求1～2任一所述突变体、权利要求8所述的可溶性蛋白、权利要求9所述的固2CN115896051A权利要求书2/2页定化酶、权利要求10所述的重组工程细胞或权利要求11所述的重组载体在催