一种突变体及其构建方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115927228A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202210736807.6C12N15/70(2006.01)(22)申请日2020.12.30C12N1/21(2006.01)C12Q1/26(2006.01)(62)分案原申请数据C12R1/19(2006.01)202011622700.62020.12.30(71)申请人中国科学院苏州生物医学工程技术研究所地址215163江苏省苏州市高新区科技城科灵路88号(72)发明人张丽星陆泽林(74)专利代理机构深圳市科进知识产权代理事务所(普通合伙)44316专利代理师孟洁(51)Int.Cl.C12N9/06(2006.01)权利要求书2页说明书8页C12N15/53(2006.01)序列表（电子公布）附图1页(54)发明名称一种突变体及其构建方法和应用(57)摘要本发明提供了一种突变体，其氨基酸序列为SEQIDNO.1上发生下列位点的突变：A417V；A417V和T122V；A417V和D229N；A417V和G438D；A417V、T122V和D229N；A417V、T122V和G438D；A417V、D229N和G438D；T122V、D229N、A417V和G438D。本发明提供的L‑赖氨酸氧化酶突变体与野生型L‑赖氨酸氧化酶相比，突变体热稳定性更好。通过本发明所提供的构建方法得到的L‑赖氨酸氧化酶突变体热稳定性更好，在较高的温度下氧化L‑赖氨酸时，仍然表现出优良的的催化活性，在L‑赖氨酸生物传感器检测及生物化工等领域具有较高的应用潜力。CN115927228ACN115927228A权利要求书1/2页1.一种突变体，其特征在于，其氨基酸序列为SEQIDNO.1上发生下列位点的突变：A417V；A417V和T122V；A417V和D229N；A417V和G438D；A417V、T122V和D229N；A417V、T122V和G438D；A417V、D229N和G438D；T122V、D229N、A417V和G438D。2.根据权利要求1所述突变体，其特征在于，所述突变体对应的氨基酸序列分别为SEQIDNO.4、SEQIDNO.7、SEQIDNO.9、SEQIDNO.11、SEQIDNO.12、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15、SEQIDNO.16。3.一种编码权利要求2所述突变体的基因序列，其特征在于，所述基因序列被配置为SEQIDNO.19、SEQIDNO.22、SEQIDNO.24、SEQIDNO.26、SEQIDNO.27、SEQIDNO.29、SEQIDNO.30、SEQIDNO.31中的任一种，其中：编码突变位点为A417V的突变体的核酸序列为SEQIDNO.19；编码突变位点为T122V和A417V的突变体的核酸序列为SEQIDNO.22；编码突变位点为D229N和A417V的突变体的核酸序列为SEQIDNO.24；编码突变位点为A417V和G438D的突变体的核酸序列为SEQIDNO.26；编码突变位点为T122V、D229N和A417V的突变体的L‑赖氨酸氧化酶突变体的核酸序列为SEQIDNO.27；编码突变位点为D229N、A417V和G438D的突变体的核酸序列为SEQIDNO.29；编码突变位点为T122V、A417V和G438D的突变体的核酸序列为SEQIDNO.30；编码突变位点为T122V、D229N、A417V和G438D的突变体的核酸序列为SEQIDNO.31。4.根据权利要求3所述基因序列，其特征在于，所述突变位点T122V的扩增引物对的核酸序列为SEQIDNO.32和SEQIDNO.33。5.根据权利要求3所述基因序列，其特征在于，所述突变位点D229N的扩增引物对的核酸序列为SEQIDNO.34和SEQIDNO.35。6.根据权利要求3所述基因序列，其特征在于，所述突变位点A417V的扩增引物对的核酸序列为SEQIDNO.36和SEQIDNO.37。7.根据权利要求3所述基因序列，其特征在于，所述突变位点G438D的扩增引物对的核酸序列为SEQIDNO.38和SEQIDNO.39。8.一种可溶性蛋白，其特征在于，其被配置为包括权利要求1～2任一所述突变体。9.一种固定化酶，其特征在于，其被配置为包括权利要求1～2任一所述突变体。10.一种重组工程细胞，其特征在于，其被配置为包括权利要求1～2任一所述突变体的编码序列。11.一种重组载体，其特征在于，其被配置为包括权利要求1～2任一所述突变体的编码序列。12.权利要求1～2任一所述突变体、权利要求8所述的可溶性蛋白、权利要求9所述的固2CN115927228A权利要求书2/2页定化酶、