预览加载中,请您耐心等待几秒...
1/10
2/10
3/10
4/10
5/10
6/10
7/10
8/10
9/10
10/10

亲,该文档总共18页,到这已经超出免费预览范围,如果喜欢就直接下载吧~

如果您无法下载资料,请参考说明:

1、部分资料下载需要金币,请确保您的账户上有足够的金币

2、已购买过的文档,再次下载不重复扣费

3、资料包下载后请先用软件解压,在使用对应软件打开

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108531626A(43)申请公布日2018.09.14(21)申请号201810385246.3(22)申请日2018.04.26(71)申请人东南大学地址210096江苏省南京市江宁区东南大学路2号申请人南京市疾病预防控制中心(72)发明人许银芳张洪英吴培(74)专利代理机构南京苏高专利商标事务所(普通合伙)32204代理人柏尚春(51)Int.Cl.C12Q1/689(2018.01)C12Q1/04(2006.01)C12R1/32(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表2页附图9页(54)发明名称一种用于等温扩增检测结核分枝杆菌的引物及包含该引物的检测试剂和方法(57)摘要本发明公开了一种用于等温扩增检测结核分枝杆菌的引物及包含该引物的检测试剂和方法,所述引物包括上游序列和下游序列,其序列分别如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示;包含该引物的检测试剂包括上游引物85BPF1、下游引物85BPR1和探针85BPB1(SEQIDNO:3);利用所述检测试剂等温扩增检测结核分枝杆菌的方法,包括以下步骤:将待检测基因样本与所述检测试剂混合,放置在可收集FAM荧光的仪器中,在35-45℃条件下孵育,检测荧光值,根据有无阳性扩增反应,判断待检测基因样本是否属于结核分枝杆菌的基因。相对于现有技术,本发明通过检测结核杆菌中的基因组,可以特异地检测结核杆菌基因,能够有效区分结核分枝杆菌和非结核分支杆菌,特异性高,反应时间短,温度过程简单。CN108531626ACN108531626A权利要求书1/1页1.一种用于等温扩增检测结核分枝杆菌的引物,其特征在于,包括上游序列和下游序列,其序列分别如下:上游引物85BPF1:gacagacgtgagccgaaagattcgagcttggggacg(SEQIDNO:1);下游引物85BPR1:ggcagccccggccgggagaacgcgcccgcggttg(SEQIDNO:2)。2.包含权利要求1所述引物的结核分枝杆菌等温扩增检测试剂,其特征在于,包括如下组分:上游引物85BPF1、下游引物85BPR1和探针85BPB1;所述探针85BPB1的序列和结构如下所示:5’-cgattgatgatcggcacggcagcggctgtag(F)(H)C(Q)tccgggcctggtggggct--SpacerC3(SEQIDNO:3),其中F=dT-FAM,H=tetrahydrofuranandQ=dT-BlackHoleQuencher1。3.根据权利要求2所述的结核分枝杆菌等温扩增检测试剂,其特征在于,所述50ul检测试剂中,含有15-35pmol上游引物85BPF1,15-35pmol下游引物85BPR1、5-15pmol探针85BPB1。4.利用权利要求2-3任一项所述检测试剂等温扩增检测结核分枝杆菌的方法,其特征在于,包括以下步骤:将待检测基因样本与TwistAmpBuffer、MgOAc以及所述检测试剂混合,放置在可收集FAM荧光的仪器中,在35-45℃条件下孵育,检测荧光值,根据有无阳性扩增反应,判断待检测基因样本是否属于结核分枝杆菌的基因。5.根据权利要求4所述的等温扩增检测结核分枝杆菌的方法,其特征在于,所述仪器为Twista仪器或荧光定量PCR仪器。2CN108531626A说明书1/5页一种用于等温扩增检测结核分枝杆菌的引物及包含该引物的检测试剂和方法技术领域[0001]本发明涉及一种用于等温扩增检测结核分枝杆菌的引物及包含该引物的检测试剂和方法,属于结核分枝杆菌检测试剂技术领域。背景技术[0002]分枝杆菌属,包括结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌。结核分枝杆菌,不是一种菌,而是结核分枝杆菌复合群,包括人结核分枝杆菌Mycobacteriumtuberculosis、牛结核分枝杆菌Mycobacteriumbovis、非洲分枝杆菌Mycobacteriumafricanum、田鼠分枝杆菌Mycobacteriummicroti),其中人结核分枝杆菌为人类结核病的主要病原体,免疫接种用的卡介苗来源于牛结核分枝杆菌。[0003]非结核分枝杆菌(nontuberculousmycobacteria,NTM)目前报道的菌种已超过150多种,少部分对人体致病,其中部分是致病菌或条件致病菌,根据NTM的生长速度,伯杰系统细菌学手册(Bergy′smanualofsystematicbacteriology)将其分为快速生长型和缓慢生长型。国际细菌命名委员会审定的NTM有猿猴分支杆菌、堪萨斯分支杆菌、海分支杆菌、苏加分支杆菌、蟾蜍分支杆菌、瘰疬分支杆菌、戈登分支杆菌、鸟分支杆菌复合群