嵌合猪瘟病毒、猪瘟标记疫苗及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115927416A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202211421879.8A61P31/14(2006.01)(22)申请日2022.11.14C12R1/19(2006.01)(71)申请人武汉大学地址430072湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学生命科学学院(72)发明人潘兹书易伟成王琴(74)专利代理机构北京金智普华知识产权代理有限公司11401专利代理师张晓博(51)Int.Cl.C12N15/62(2006.01)C12N15/70(2006.01)C12N1/21(2006.01)C12N7/01(2006.01)A61K39/187(2006.01)权利要求书2页说明书15页序列表（电子公布）附图8页(54)发明名称嵌合猪瘟病毒、猪瘟标记疫苗及其制备方法和应用(57)摘要本申请公开了嵌合猪瘟病毒、猪瘟标记疫苗及其制备方法和应用。本申请实施例采用反向遗传学操作技术将猪瘟减毒活疫苗C株的非编码区和E2蛋白的主要抗原区域替换为BVDVHubeistrain相对应的区域，构建了嵌合猪瘟病毒的感染性克隆。将感染性克隆通过细胞转染和传代拯救得到了特性稳定的嵌合猪瘟病毒。该嵌合猪瘟病毒可以在猪源细胞稳定复制，具有遗传稳定性和安全性；免疫机体后可诱导产生特异性抗体，还能够为猪体提供抵抗猪瘟病毒强毒致死感染的完全保护。并且，该毒株可免疫产生BVDVE2特异性抗体以达到区分疫苗接种猪和野生型猪瘟病毒感染猪，从而该毒株具有作为猪瘟标记疫苗的应用前景。CN115927416ACN115927416A权利要求书1/2页1.一种分离的感染性多核苷酸或感染性克隆，所述感染性多核苷酸或所述感染性克隆携带嵌合基因组，所述嵌合基因组包含一个开放阅读框及处于所述开放阅读框两端的5’UTR区和3’UTR区；所述5’UTR区和所述3’UTR区来源于BVDV，其核苷酸序列分别如SEQIDNO.1～2所示；所述开发阅读框编码Core、Erns(E0)、E1、E2、Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B；Core、Erns(E0)、E1、Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B以及E2的C端区域编码基因的核苷酸序列均来自于猪瘟疫苗C株的基因组；所述E2蛋白N端抗原区来源于BVDV，其编码核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；将所述感染性多核苷酸或所述感染性克隆引入细胞并通过传代可以产生感染性猪瘟病毒颗粒。2.权利要求1所述感染性多核苷酸或感染性克隆，还包含在原核宿主细胞中复制的载体序列。3.权利要求1所述感染性多核苷酸或感染性克隆，所述感染性多核苷酸或感染性克隆是DNA多核苷酸或RNA多核苷酸。4.一种载体，包含权利要求1～3任一所述的感染性多核苷酸或感染性克隆。5.一种细胞，携带权利要求1～3任一所述的感染性多核苷酸或感染性克隆。6.一种猪瘟病毒颗粒，所述猪瘟病毒颗粒包裹携带有嵌合基因组的单链RNA，所述嵌合基因组包含一个开放阅读框及处于所述开放阅读框两端的5’UTR区和3’UTR区；所述5’UTR区和所述3’UTR区的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1～2所示；所述开发阅读框编码Core、Erns(E0)、E1、E2、Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B；Core、Erns(E0)、E1、Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B以及E2的C端区域编码基因的核苷酸序列均来自于猪瘟疫苗C株的基因组；所述E2蛋白N端抗原区编码核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。7.一种组合物或标记疫苗，所述组合物或标记疫苗包含猪瘟病毒颗粒，所述猪瘟病毒颗粒包裹一携带有嵌合基因组的单链RNA，所述嵌合基因组包含一个开放阅读框及处于所述开放阅读框两端的5’UTR区和3’UTR区；所述5’UTR区和所述3’UTR区的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1～2所示；所述开发阅读框编码Core、Erns(E0)、E1、E2、Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B；Core、Erns(E0)、E1、Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B以及E2的C端区域编码基因的核苷酸序列均来自于猪瘟疫苗C株的基因组；所述E2蛋白N端抗原区编码核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。8.根据权利要求7所述的组合物或标记疫苗，还包括药学上或兽医学上可接受的运载体、赋形剂、媒介物或佐剂；可选地，所述运载体、赋形剂、媒介物或佐剂均选自氢氧化铝，免疫刺激复合物，非离子嵌段聚合物或共聚物，细胞因子，皂苷，单磷酰脂质A，和胞壁酰二肽，硫酸铝钾，从大肠杆菌中