一种钙螯合肽及其制备方法及应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115947776A(43)申请公布日2023.04.11(21)申请号202210794998.1C07K1/22(2006.01)(22)申请日2022.07.07C07K1/02(2006.01)C07K1/34(2006.01)(71)申请人重庆师范大学C07K1/36(2006.01)地址401331重庆市沙坪坝区大学城中路A23L33/165(2016.01)37号A23L33/18(2016.01)(72)发明人和七一余晓东吴七云(74)专利代理机构重庆上义众和专利代理事务所(普通合伙)50225专利代理师孙人鹏(51)Int.Cl.C07K5/083(2006.01)C12P21/06(2006.01)C07K1/14(2006.01)C07K1/20(2006.01)C07K1/16(2006.01)权利要求书1页说明书10页序列表（电子公布）附图5页(54)发明名称一种钙螯合肽及其制备方法及应用(57)摘要本发明公开了一种钙螯合肽，所述钙螯合肽的氨基酸序列为LAD，其氨基酸序列为Leu‑Ala‑Asp；所述钙螯合肽的分子量为317.35Da；所述钙螯合肽的钙结合活性为0.738mmol/g；所述钙螯合肽的氨基酸来源为蛤类。本发明还公开了其具体的制备方法和用途。螯合后生成的肽‑钙复合物结构稳定、钙离子释放率良好。CN115947776ACN115947776A权利要求书1/1页1.一种钙螯合肽，其特征在于，所述钙螯合肽为LAD，其氨基酸序列为Leu‑Ala‑Asp。2.如权利要求1所述的钙螯合肽，其特征在于，所述钙螯合肽的分子量为317.35Da。3.如权利要求1所述的钙螯合肽，其特征在于，所述钙螯合肽的钙结合活性为0.738mmol/g；所述钙螯合肽的氨基酸来源为蛤类。4.如权利要求1所述的钙螯合肽，其特征在于，所述的钙螯合肽，其钙离子和LAD螯合的作用位点包括为羧基氧原子和氨基氮原子；所述钙螯合肽的氨基酸来源为花蛤。5.如权利要求1所述的钙螯合肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备蛤酶解物，取蛤肉，加入蛋白酶进行酶解，冻干，得酶解物；(2)收集螯合肽：将酶解物溶于水，通过分离柱进行洗脱，收集洗脱液，浓缩后冷冻干燥；(3)制备螯合肽；取洗入脱液冻干品，溶解于水中，注入葡聚糖凝胶的色谱柱中，进行洗脱，得螯合肽；(4)螯合反应：取螯合肽，加入钙溶液，混匀，调节pH为6‑8，进行螯合反应，反应温度为20‑50℃，反应时间15‑120min；加入缓冲液，调pH为7‑8左右让游离的钙离子沉淀，继续孵育15‑120min；将反应混合物离心，取上清液，即得。6.如权利要求5所述的钙螯合肽的制备方法，其特征在于：步骤(1)取蛤肉后，打至肉糜状态，加入去离子水，搅拌混匀后，加热灭活样品中的酶，然后调节样品pH6‑8，按照酶：花蛤肉的重量比0.5‑5％的比例，加入蛋白酶，进行酶解，酶解温度为40‑60℃，酶解时间为3‑7h，得酶解液；将酶解液加热灭活后，离心冷冻干燥，得酶解物；步骤(2)中，分离柱的填料为IMAC填料；洗脱为使用3‑8倍柱体积的pH6‑8灭菌水清洗掉未结合肽，再用pH2‑4的灭菌水进行洗脱；步骤(3)中，取H2组分的洗脱液，进行分离，冷冻干燥；步骤(4)螯合反应：取螯合肽，加入钙溶液，混匀，调节pH为6‑8，进行螯合反应，反应温度为25‑45℃，反应时间20‑100min；加入缓冲液，调pH为7‑8左右让游离的钙离子沉淀，继续孵育20‑100min；将反应混合物离心，取上清液。7.如权利要求6所述的钙螯合肽的制备方法，其特征在于：步骤(1)中的蛋白酶为蛋白酶或复合蛋白酶；所述的“将酶解液加热灭活后”是指沸水浴加热5‑20分钟，调整pH至6‑8；步骤(2)中，取酶解物溶于去离子水后，用水相滤膜过滤后，再进行洗脱；步骤(3)中，取洗入脱液冻干品，溶解于水中，用水相滤膜过滤后，再进行洗脱，流速为0.1‑1.2mL/min。8.如权利要求5所述的钙螯合肽的制备方法，其特征在于：所述的蛋白酶或复合蛋白酶的酶活力≥100U/mg；所述的钙溶液为CaCl2溶液。9.如权利要求5所述的钙螯合肽的制备方法，其特征在于：所述的螯合条件为蛋白酶或复合蛋白酶水解物浓度1g/L、钙浓度2.5mM、螯合温度30℃、螯合时间0.5h、溶液pH7.0。10.权利要求1‑8任意所述的钙螯合肽在制备补钙制剂、或营养补充剂、或功能食品中的应用。2CN115947776A说明书1/10页一种钙螯合肽及其制备方法及应用技术领域[0001]本发明属于钙补充剂技术领域，尤其涉及一种花蛤钙螯合肽及其制备方法。背景技术[0002]钙是构成人体结构的基本元素之一，在人体的生长发育、健康和