透明质酸寡糖组合物及其制备方法和用途.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115944549A(43)申请公布日2023.04.11(21)申请号202211676342.6C12P19/04(2006.01)(22)申请日2022.12.26C12P19/00(2006.01)(71)申请人华熙生物科技股份有限公司地址250101山东省济南市高新技术开发区天辰大街678号(72)发明人王浩郑庆芳张猛张晓鸥毛华郭学平(74)专利代理机构北京唐颂永信知识产权代理有限公司11755专利代理师刘伟(51)Int.Cl.A61K8/60(2006.01)A61Q19/08(2006.01)C12P19/14(2006.01)C12P19/12(2006.01)权利要求书1页说明书11页附图4页(54)发明名称透明质酸寡糖组合物及其制备方法和用途(57)摘要本申请提供一种透明质酸寡糖组合物，所述透明质酸寡糖组合物包括式(I)所示结构的透明质酸寡糖，所述透明质酸寡糖还原端为N‑乙酰基葡萄糖：其中，X选自H、K、Na、Ca或Zn；n为选自1‑4正整数；所述透明质酸寡糖组合物的重均分子量小于等于1kDa。本申请的透明质酸寡糖还原端为N‑乙酰氨基葡萄糖，可以显著促进真皮成纤维细胞胶原蛋白的生成，尤其对成纤维细胞III型、IV型胶原蛋白的生成均具有显著促进作用。CN115944549ACN115944549A权利要求书1/1页1.一种透明质酸寡糖组合物，其特征在于，所述透明质酸寡糖组合物包括式(I)所示结构的透明质酸寡糖，所述透明质酸寡糖还原端为N‑乙酰基葡萄糖：其中，X选自H、K、Na、Ca或Zn；n为选自1‑4正整数；所述透明质酸寡糖组合物的重均分子量小于等于1kD，所述透明质酸寡糖组合物中至少含有两种透明质酸寡糖。2.根据权利要求1所述的透明质酸寡糖组合物，其特征在于，在所述透明质酸寡糖组合物中，n＝2的透明质酸寡糖的质量占比为55‑80％，n＝1的透明质酸寡糖的质量占比为1‑10％，n＝3的透明质酸寡糖的质量占比为5‑35％，n＝4的透明质酸寡糖的质量占比为1‑10％。3.根据权利要求1所述的透明质酸寡糖组合物，其特征在于，在所述透明质酸寡糖组合物中，n＝2的透明质酸寡糖的质量占比为60‑75％，n＝1的透明质酸寡糖的质量占比为1‑10％，n＝3的透明质酸寡糖的质量占比为15‑30％，n＝4的透明质酸寡糖的质量占比为1‑8％。4.根据权利要求1所述的透明质酸寡糖组合物，其特征在于，所述透明质酸寡糖组合物在化妆品或药械产品中的质量浓度为0.01％‑5％，进一步优选为0.05％‑1％。5.一种如权利要求1‑4中任一项所述的透明质酸寡糖组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：将透明质酸用透明质酸酶进行酶解反应，分离酶解反应物以得到透明质酸寡糖组合物，其中，所述透明质酸酶为内切‑β‑N‑乙酰氨基葡萄糖苷酶，优选，所述透明质酸酶为利用毕赤酵母工程菌表达的山大齿猛蚁透明质酸水解酶。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在所述酶解反应中，所述透明质酸的初始浓度为40‑100g/L，优选所述透明质酸酶的初始酶活为1.8×105‑2.5×105U/mL，进一步优选所述酶解反应温度为30‑50℃，更优选为37‑45℃。7.一种如权利要求1‑4中任一项所述的透明质酸寡糖组合物在促进III型和/或IV型胶原蛋白生成中的用途。2CN115944549A说明书1/11页透明质酸寡糖组合物及其制备方法和用途技术领域[0001]本申请属于生物工程技术领域，具体地，涉及一种透明质酸寡糖组合物及其制备方法，以及透明质酸寡糖组合物在促进III型、IV型胶原蛋白生成中的用途。背景技术[0002]透明质酸(Hyaluronicacid，HA)是人体中重要的成分，由N‑乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)和D‑葡萄糖醛酸(GlcA)二糖重复单位通过β‑1,4‑糖苷键和β‑1,3‑糖苷键构成的无分支结构的高分子酸性黏多糖，广泛分布于动物组织细胞间质和某些细菌的荚膜中。研究发现，HA发挥生理作用与其分子量的大小密切相关，分子量越小生物活性越高。[0003]酶法制备透明质酸寡糖，专一性强，能特异性地降解化学键而不对其他分子基团产生影响，可通过控制加酶量及反应时间得到均一的不同分子量透明质酸，同时具有反应温和、重复性好等优点，因此，酶法是制备低分子量透明质酸最理想的方法。根据不同的来源、催化机制和底物与产物特异性，HAase可以分为三类。三种酶结构不同，产物也不同。第一类为HA裂解酶(EC4.2.2.1)，主要存在于细菌、噬菌体以及真菌中，通过β‑消除反应裂解HA的β‑1,4‑糖苷键，产生还原端为N‑乙酰氨基葡萄糖的不饱和双糖分子；第二类为内切‑β‑葡萄糖醛酸苷酶(EC3.2.1.36