一种透明质酸寡糖组合物及其制备方法和用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113801904A(43)申请公布日2021.12.17(21)申请号202111094368.5C12P19/12(2006.01)(22)申请日2021.09.17C12P19/14(2006.01)A61K8/60(2006.01)(71)申请人山东华熙海御生物医药有限公司A61K8/73(2006.01)地址250104山东省济南市高新区世纪大A61Q19/00(2006.01)道中段3333号申请人华熙生物科技股份有限公司(72)发明人罗德学张天萌吴梓萌王景张旭胡恺强张晓鸥李红红郭学平(74)专利代理机构北京唐颂永信知识产权代理有限公司11755代理人刘伟(51)Int.Cl.C12P19/00(2006.01)C12P19/04(2006.01)权利要求书2页说明书15页附图4页(54)发明名称一种透明质酸寡糖组合物及其制备方法和用途(57)摘要本发明提供一种透明质酸寡糖组合物及其制备方法和用途，其中所述透明质酸寡糖组合物包括还原端为糖醛酸结构的透明质酸寡糖。该透明质酸寡糖组合物可以提高神经酰胺的合成和或透明质酸合成酶1(HAS1)和/或透明质酸合成酶3(HAS3)的表达。本发明通过将酶解反应耦联超滤、纳滤可以使酶解得到的寡糖及时从酶解体系中分离出来，减少寡糖对酶解的抑制作用，提高酶解效率，缩短酶解时间。酶解完后，利用超滤把酶截留下来可以再重复利用1‑2次，提高酶的重复利用度，同时省掉了加热灭酶活阶段，减少了加热对寡糖活性的影响，使寡糖的活性得到最大化的保留。减少活性炭加入量，减少了对操作人员的炭污染，简化了纯化工艺。CN113801904ACN113801904A权利要求书1/2页1.一种透明质酸寡糖组合物，其特征在于，所述透明质酸寡糖组合物包括式(I)所示结构的透明质酸寡糖：其中，n为选自0‑5的整数，X选自H、K、Na、Ca或Zn，优选为Na；在所述透明质酸寡糖组合物中，n＝1的透明质酸寡糖的质量占比为35‑70％；n＝0的透明质酸寡糖的质量占比为5‑40％；n＝2的透明质酸寡糖的质量占比为0‑50％；n＝3的透明质酸寡糖的质量占比为0‑15％；n＝4的透明质酸寡糖的质量占比为0‑10％；n＝5的透明质酸寡糖的质量占比为0‑5％。2.根据权利要求1所述的透明质酸寡糖组合物，其特征在于，在所述透明质酸寡糖组合物中，n＝1的透明质酸寡糖的质量占比为35‑70％；n＝0的透明质酸寡糖的质量占比为5‑40％；n＝2的透明质酸寡糖的质量占比为1‑50％；n＝3的透明质酸寡糖的质量占比为1‑15％；n＝4的透明质酸寡糖的质量占比为1‑10％；n＝5的透明质酸寡糖的质量占比为0.01‑1.5％。3.根据权利要求1所述的透明质酸寡糖组合物，其特征在于，在所述透明质酸寡糖组合物中，n＝1的透明质酸寡糖的质量占比为40‑60％；n＝0的透明质酸寡糖的质量占比为5‑15％；n＝2的透明质酸寡糖的质量占比为20‑40％；n＝3的透明质酸寡糖的质量占比为1‑10％；n＝4的透明质酸寡糖的质量占比为1‑5％；n＝5的透明质酸寡糖的质量占比为0.01‑1.5％。4.根据权利要求1所述的透明质酸寡糖组合物，其特征在于，所述透明质酸寡糖组合物的重均分子量小于等于1kDa。5.根据权利要求1所述的透明质酸寡糖组合物，其特征在于，所述透明质酸寡糖组合物用于化妆品或保健品，优选在所述化妆品或保健品中的质量浓度为0.001‑10％。6.一种如权利要求1‑5任一项所述的透明质酸寡糖组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：2CN113801904A权利要求书2/2页将透明质酸用透明质酸酶进行酶解反应，分离酶解反应物以得到产物原液，对所述产物原液进行浓缩以得到产物浓缩液；去除所述产物浓缩液中的杂质，干燥得到透明质酸寡糖组合物，其中，所述透明质酸酶为酶切β‑1,3糖苷键的透明质酸酶，优选，所述透明质酸酶为利用毕赤酵母工程菌表达的水蛭透明质酸水解酶，进一步优选，所述分离为超滤；进一步优选，所述浓缩为纳滤；进一步优选，使用活性炭吸附来去除杂质。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在所述酶解反应中，所述透明质酸的初始浓度为5‑150g/L，优选，所述透明质酸的分子量为1000‑2000kDa，进一步优选所述透明质酸酶的初始含量为1×104‑3×105U/mL，进一步优选所述透明质酸酶与所述透明质酸的初始比值为1‑5U/mg。8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，超滤采用截留分子量为600‑1000Da的超滤膜，纳滤采用截留分子量为100‑300Da的纳滤膜，优选所述酶解反应的温度为30‑46℃，时间为12‑24h。9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述