一种长效的嵌合抗原受体、载体及其构建方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115960256A(43)申请公布日2023.04.14(21)申请号202211177828.5A61P35/00(2006.01)(22)申请日2022.09.26(71)申请人东南大学地址211102江苏省南京市江宁区东南大学路2号(72)发明人肖忠党沈杨孙博(74)专利代理机构南京苏高专利商标事务所(普通合伙)32204专利代理师王艳(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)C12N15/867(2006.01)C12N5/10(2006.01)A61K39/00(2006.01)权利要求书2页说明书7页序列表（电子公布）附图3页(54)发明名称一种长效的嵌合抗原受体、载体及其构建方法和应用(57)摘要本发明公开了一种长效的嵌合抗原受体、载体及其构建方法和应用，所述长效的嵌合抗原受体包括信号肽、靶点的scFv、铰链结构域、跨膜结构域、胞内共刺激结构域、JAK酶激活转导域和胞内信号转导域，由本发明制备的CAR‑NK和CAR‑T细胞对表达靶点的肿瘤细胞有很强的持久杀伤作用。本发明提供的CAR‑NK和CAR‑T细胞可用于实体瘤的抗肿瘤治疗。CN115960256ACN115960256A权利要求书1/2页1.一种长效的嵌合抗原受体，其特征在于，所述长效的嵌合抗原受体包括信号肽、靶点的scFv、铰链结构域、跨膜结构域、胞内共刺激结构域、JAK酶激活信号转导结构域和胞内信号转导域，所述JAK酶激活信号转导结构域能够捕获JAK酶并激活，所述JAK酶包括JAK1、JAK2、JAK3或Tyk2，所述JAK1的GeneID为3716，JAK2的GeneID为3717，JAK3的GeneID为3718，Tyk2的GeneID为7297。2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述JAK酶为JAK1酶，所述JAK1酶激活信号转导结构域，其90‑99%同一性的序列选自以下一个或者其中两个以上叠加：SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3、SEQIDNo.4、SEQIDNo.5、SEQIDNo.6、SEQIDNo.7、SEQIDNo.8、SEQIDNo.9、SEQIDNo.10。3.根据权利要求1所述的长效的双靶点嵌合抗原受体，其特征在于，所述信号肽包括T细胞受体的α链或β链、CD3、CD4、CD5、CD8、CD28、CD33、CD45、CD80、CD86、CD134、CD137、ICOS、GM‑CSF、免疫球蛋白重链或免疫球蛋白轻链的信号肽或与所述信号肽具有90‑99%同一性的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述靶点的scFv为胞外区包含肿瘤细胞表面高表达的靶点的单链抗体核苷酸序列，所述靶点包含B7H3、NKG2D、GPC3、Claudin18.2、PD‑L1、MUC1、Mesothelin、Her2、EGFR、PSMA、CEA、GD2、EpCAM、EGFRvⅢ、CD70、CD20、CD133、CD177、AFP、AXL、CD171、CD117、C‑MET、FAP、MUC16、NY‑ESO‑1、PSCA、VEGFR‑2、Lewis‑Y、Gp100、FAP、EPHA2中任意一个或几个组合，例如，所述靶点为B7H3，其核苷酸序列如SEQIDNo.22所示。5.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述铰链结构域包括以下分子的铰链区：IgG、CD8α、CD28、IL‑2受体，例如CD8α的铰链区的核苷酸序列如SEQIDNo.23所示。6.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜结构域为选自以下蛋白质的跨膜结构域或与所述蛋白质具有90‑99%同一性的氨基酸序列：T细胞受体的α、β或ζ链、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD8O、CD86、CD134、CD137或CD154，作为优选，所述跨膜结构域为CD8的跨膜区，其核苷酸序列如SEQIDNo.24所示。7.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述胞内共刺激结构域通过选自以下蛋白质或与所述蛋白质具有90‑99%，同一性的氨基酸序列获得的功能性信号结构域的一种或几种：MHCI类分子、TNF受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白质、细胞因子受体、整联蛋白、淋巴细胞活化信号分子、活化NK细胞受体、BTLA、Toll配体受体、OX40、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CD137、CDS、ICAM‑1、LFA‑1、CLAUDIN、CD278或GITR中的一种或几种，作为优选，所述胞内共刺激结构域选自CD137，其核苷酸序列如S