一种基于SSR标记的紫罗兰指纹图谱、构建方法及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115961083A(43)申请公布日2023.04.14(21)申请号202310005589.3(22)申请日2023.01.04(71)申请人赣南师范大学地址341000江西省赣州市章贡区师院南路1号(72)发明人谭晨陈道宗张海梅陈海东沈文杰刘镒(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569专利代理师黄明光(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书9页序列表（电子公布）附图1页(54)发明名称一种基于SSR标记的紫罗兰指纹图谱、构建方法及其应用(57)摘要本发明提供了一种基于SSR标记的紫罗兰指纹图谱、构建方法及其应用，涉及植物品种鉴定技术领域。本发明提供了一种紫罗兰品种指纹图谱的构建方法，利用筛选获得的8对SSR标记引物作为构建紫罗兰指纹图谱的核心引物，在同一迁移位置，分别用“1”和“0”标记有无扩增片段，构建了37个紫罗兰品种的指纹图谱。8对引物的特异性条带组合作为一个品种的DNA指纹，可用于鉴别不同品种。本发明提供的紫罗兰指纹图谱为从国内外紫罗兰品种种质资源中筛选出有价值的育种材料提供了科学依据，减少育种盲目性，提高了紫罗兰育种效率，为新品种知识产权的保护和品种鉴定、紫罗兰创新育种提供了依据。CN115961083ACN115961083A权利要求书1/1页1.一种用于鉴定紫罗兰的SSR标记引物组，其特征在于，所述引物组包括8对特异性引物对，所述引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1～SEQIDNO.16所示。2.一种紫罗兰品种指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：利用引物组对紫罗兰各品种DNA进行PCR扩增，对所得产物进行电泳检测后即可获得所述紫罗兰品种指纹图谱。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述引物组包括8对特异性引物对，所述引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1～SEQIDNO.16所示。4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述紫罗兰品种包括：种源为日本泷井的和谐深玫红、和谐浅玫瑰花、和谐淡紫、和谐紫、圣诞杏、圣诞紫、圣诞深红、圣诞白、贵族白；种源为日本坂田的辉煌白、辉煌粉、辉煌桃粉、辉煌玫瑰红、辉煌紫、辉煌淡紫、麦萌浅粉、麦萌白、麦萌紫、麦萌玫红、麦萌红；种源为美国泛美的卡兹杏色、卡兹红宝石、卡兹白色、铁系蓝色、铁杏色、铁系淡黄樱草、铁系宫殿紫、佳酿白、佳酿玫红、佳酿紫、彩虹方糖；种源为美国的草莓冰糕、紫罗兰紫、紫罗兰深玫红、紫罗兰玫红、紫罗兰桃红、紫罗兰乳白。5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系包括：50ng/μLDNA模板2μL、10ng/μL上游引物0.5μL、10ng/μL下游引物0.5μL、PCRMasterMix5μL、加ddH2O至10μL。6.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应程序为：94℃5min；94℃30s、60℃30s、72℃30s，9个循环，每个循环退火温度递减0.5℃；94℃30s、55℃30s、72℃30s，30个循环；72℃10min。7.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述电泳检测后统计SSR扩增条带，在相同迁移位置上，将有条带的记为“1”，无条带的记为“0”，形成各自的数据矩阵即为所述紫罗兰品种指纹图谱。8.权利要求1所述的引物组或权利要求2‑7任意一项所述的构建方法在紫罗兰品种鉴定中的应用。9.一种紫罗兰品种的鉴定方法，其特征在于，所述鉴定方法包括如下步骤：提取待检紫罗兰的基因组DNA，以权利要求1所述的引物组对所述基因组DNA进行PCR扩增，所得PCR扩增产物进行电泳检测；将所得电泳检测结果与利用权利要求2‑7任意一项所述构建方法构建得到的指纹图谱进行对照即可实现待检紫罗兰的品种鉴定。10.根据权利要求9所述的鉴定方法，其特征在于，所述电泳检测结果为：电泳检测后统计SSR扩增条带，在相同迁移位置上，将有条带的记为“1”，无条带的记为“0”形成的数据矩阵。2CN115961083A说明书1/9页一种基于SSR标记的紫罗兰指纹图谱、构建方法及其应用技术领域[0001]本发明涉及植物品种鉴定技术领域，具体涉及一种基于SSR标记的紫罗兰指纹图谱、构建方法及其应用。背景技术[0002]SSRs(简单重复序列)，也称为微卫星，是发生在编码区和非编码区的串联重复DNA基序。研究发现，SSR普遍存在于基因组中，重复单位为1～6nt。SSR分子标记具有数量多、多态性高、等位变异多、共显性、成本低、易于PCR检测等优点，在遗传分析中得到广泛应用，如群体结构和遗传多样性分析、QTL定位、标记