基于SSR标记的棉花新石K28的DNA指纹图谱构建.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113637793A(43)申请公布日2021.11.12(21)申请号202111079910.X(22)申请日2021.09.15(71)申请人石河子农业科学研究院地址832000新疆维吾尔自治区石河子北泉镇农科中心小区(72)发明人杨永林秦江鸿李豪杨名徐媛媛(74)专利代理机构北京华际知识产权代理有限公司11676代理人颜翠萍(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书12页附图1页(54)发明名称基于SSR标记的棉花新石K28的DNA指纹图谱构建(57)摘要本发明公开了的基于SSR标记的棉花新石K28的DNA指纹图谱构建,包括以下步骤：S1、取陆地棉花品种种子42份，将棉花种子催芽；S2、当棉花种子发芽后7d每株选取一片幼嫩真叶置于研钵中，向研钵中加入液氮，将真叶进行研磨，研磨后得到混合物；S3、通过CTAB法提取真叶混合物内的棉花基因组DNA；S4、对比42组实验数据，进行遗传多样性分析，并建立档案；优选的：所述S1～S4中的SSR引物均有中国农业科学院棉花研究所棉花国家重点实验室提供。本发明的有益效果是：有效保护育种者的品种权与品种的真实性；可为未来新疆陆地棉育种工作提供参考依据。CN113637793ACN113637793A权利要求书1/1页1.基于SSR标记的棉花新石K28的DNA指纹图谱构建，其特征在于，包括以下步骤：S1、取陆地棉花品种种子42份，将棉花种子催芽。S2、当棉花种子发芽后7d每株选取一片幼嫩真叶置于研钵中，向研钵中加入液氮，将真叶进行研磨，研磨后得到混合物。S3、通过CTAB法提取真叶混合物内的棉花基因组DNA。S4、对比42组实验数据，进行遗传多样性分析，并建立档案。2.根据权利要求1所述的基于SSR标记的棉花新石K28的DNA指纹图谱构建，其特征在于：所述S1～S4中的SSR引物均有中国农业科学院棉花研究所棉花国家重点实验室提供。3.根据权利要求1所述的基于SSR标记的棉花新石K28的DNA指纹图谱构建，其特征在于：所述S1中棉花种子催芽时温度为28℃，光照L/D＝12h/12h。4.根据权利要求1所述的基于SSR标记的棉花新石K28的DNA指纹图谱构建，其特征在于：所述SSR‑PCR扩增条件为统一稀释CTAB法提取的棉花基因组DNA溶液浓度至50ng·μL‑1，PCR扩增体系:模板DNA1μL，Buffer(含MgCl)1μL，dNTPs(10mmol·L‑1)0.3μL，正向引物F(10μmol·L‑1)0.5μL，反向引物R(10μmol·L‑1)0.5μL，Taq酶(2.5U·μL‑1)0.2μL，ddH2O6.5μL。PCR扩增程序为：(1)预变性：94℃5min；(2)扩增：94℃变性45s，60℃退火45s，72℃延伸45s，进行32次循环；(3)终延伸：72℃10min，(4)扩增产物于4℃保存。5.根据权利要求1所述的基于SSR标记的棉花新石K28的DNA指纹图谱构建，其特征在于：所述扩增产物在8％的非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳检测，每个样品上样1.5μL，220V电压电泳1h，电泳结束后参考张军等[14]的方法银染，步骤如下:(1)银染(0.1％硝酸银溶液)12～15min；(2)显色(2％氢氧化钠+1％甲醛)5～10min；(3)纯水漂洗2～3次，银染显影并使用相机拍照记录。6.根据权利要求1所述的基于SSR标记的棉花新石K28的DNA指纹图谱构建，其特征在2于：所述各引物对应不同基因型扩增，计算位点多态性信息含量按照公式PIC＝1–ΣPi计算。7.根据权利要求1所述的基于SSR标记的棉花新石K28的DNA指纹图谱构建，其特征在于：所述建立档案根据农业部办公厅印发的《农作物种子标签二维码编码规则》进行生成二维码。2CN113637793A说明书1/12页基于SSR标记的棉花新石K28的DNA指纹图谱构建技术领域[0001]本发明涉及棉花技术领域，具体是基于SSR标记的棉花新石K28的DNA指纹图谱构建。背景技术[0002]棉花是重要的纤维作物，新疆是我国最大的植棉产区。随着新疆地区棉花育种进程加快，一些棉花新品种是在原品种基础上改良少数或单个性状的衍生品种增多,形态越来越相似，亲本遗传基础愈加狭窄，完全依据形态性状进行棉花品种的辨别也愈加困难。[0003]传统的棉花品种真实性和纯度是通过田间种植的方法鉴定的,耗时长、成本高、时效性差,易受环境因素的影响。因此，本领域技术人员提供了基于SSR标记的棉花新石K28的DNA指纹图谱构建，以解决上述背景技术中提出的问题。发明内容[0004]本发明的目的在于提供基于SSR标记的