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利用SSR分子标记构建玉米自交系的指纹图谱

李丽华魏昕潘光堂*
(四川农业大学玉米研究所，四川雅安625014)
E-mail：[e-mail]。
*E-mail：[e-mail]
摘要：本实验利用80对SSR引物对20个玉米自交系进行扩增，综合考虑扩增带的清
晰程度及多态性、条带多少、引物重复性高低，筛选出Phi080，Phi123，Umc1061，Phi126，
Phi065，Dupssr13，Phi102228，bnlg240，Phi083，Phi024等10对引物，构建了20个玉
米自交系的指纹图谱。其中有7个材料各用1对引物就可确定其特征性谱带，有3个材料
各需用2对引物组合就能区分，有2个材料需4对引物组合方能予以有效区分，其余材料
则需8对引物组合才可区分。本实验还对这10对引物的重复性作了验证，再次证明利用
SSR标记构建玉米自交系指纹图谱是可行的，也是可靠的。
关键词：玉米自交系SSRDNA指纹图谱

DNA分子标记技术本质上指能反映生物个体或种群间基因组中某种差异的特异性
DNA片段[1]。简单序列重复SSR分子标记又称微卫星[2]，是由1-4个碱基组成的重复序列，
在真核生物基因组中普遍存在，表现为共显性标记。SSR标记已经成为研究种质资源遗传
多样性，基因作图，亲子鉴定的首选标记[3,4]。
近代指纹分析的概念结合生物技术的发展，延伸到了DNA指纹图谱分析,而且应用范
围也从犯罪学扩大到医学和其他生命科学领域[5]。DMA分子标记大多以电泳谱带的形式表
现生物个体之间DNA差异,通常也称为DNA的指纹图谱[6]。
近年来，一些学者在玉米指纹图谱的利用方面做了大量研究工作。谭君等（2003）[7]对
西南地区在生产上正在使用的73份玉米自交系构建了SSR指纹图谱表明利用SSR技术进
行玉米自交系鉴定是可行、有效的。赵久然等（2003）[8,9]利用SSR分子标记对中国玉米
新品种DNA指纹库建立进行了一系列系统研究，他们对SSR技术进行了优化，最终建立
一套完善的适用于玉米品种鉴定的SSR标准体系。
DNA指纹图谱技术可以对植物基因型做出明确的鉴定，特别是对那些没有准确系谱记
载的育种材料进行遗传分类，弥补系谱记载的缺失；育种家可以采用这项技术鉴定自交系

[10]
的遗传特征，保护这些自交系的品种权免受侵犯。因此，研究玉米自交系的指纹图谱

具有重要意义。

本项目得到“北京农业育种基础研究创新平台，北京市自然科学基金项目‘中国玉米标准DNA指纹库构

建及关键技术研究’课题”和“四川省生物技术攻关项目”的资助。

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本研究利用SSR分子标记技术，目的是构建四川农业大学玉米研究所近年选育的优良
自交系的指纹图谱，以期找出其特征谱带，更有效地保护它们的知识产权。
1材料与方法

1.1供试材料
表1列出四川农业大学玉米研究所的15个骨干自交系和5个代表常见的四大类群的模
式自交系。
表1供试材料的名称及编号

编号名称编号名称
121-ES1118-599
2SCML20412441950

3东54-313983015-6
4306614SCML203
5Lc9951508-641
6SAM300116478
7SAM100117Mo17

8SCML20218丹340
9SCML10319黄早四
10975-12205003
1.2DNA提取
每个供试材料各取种子6-9粒，置于恒温培养箱中暗培养7天。采用Maroof等（1994）
[11]提出的CTAB法[11]提取叶片总DNA，并纯化，用BeckmanDU800型紫外可见分光光度
计检测DNA的质量和浓度，将DNA样品稀释至10ng/μl备用。
1.3PCR扩增
SSR扩增反应所用引物由塞百胜公司合成。反应体系：每20μl体积中含1ХBuffer，

2.5mmol/LMgCl2，0.4mmol/LdNTP，SSR引物（前引物和后引物）各0.25μmol/l，1UTaq
DNA聚合酶，20ngDNA模板，反应液上加盖一滴矿物油，于PTC-100PCR仪上进行扩增。
反应程序：94℃预变性5min，1个循环；94℃变性40S，60℃退火35S，72℃延伸45S，
共进行30个循环，最后在72℃延伸5min。
1.4电泳、银染
在扩增产物中加入3µl3×SGB(98%去离子甲酰胺；10mMEDTA，pH8.0；0.025%溴酚
兰；0.025二甲苯青)。
上样量4.5µl，在1×TBE缓冲液条件下，用4.5%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，恒定功

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