丁酸梭菌SZ及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115975866A(43)申请公布日2023.04.18(21)申请号202211379532.1C12N9/26(2006.01)(22)申请日2022.11.04C12N9/42(2006.01)A23K10/18(2016.01)(83)生物保藏信息A23K50/30(2016.01)CGMCCNO.247432022.04.21A23K10/12(2016.01)(71)申请人中国农业科学院北京畜牧兽医研究A23K10/30(2016.01)所A23K10/37(2016.01)地址100193北京市海淀区圆明园西路2号A23K20/163(2016.01)申请人石家庄飞龙饲料有限公司A23K20/20(2016.01)(72)发明人廖秀冬李桂霞李明吴静璇刘国庆(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002专利代理师黄爽(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书7页C12N1/20(2006.01)序列表（电子公布）附图6页(54)发明名称丁酸梭菌SZ及其应用(57)摘要本发明公开了丁酸梭菌SZ及其应用。本发明的丁酸梭菌SZ分离自健康猪肠道，通过研究该菌的生物学特性并对其全基因组序列进行系统评价与应用，该菌株具有优异的生物学功能和抗逆特性，全基因组序列中功能酶基因表达和特定功能基因表达丰富，且不存在已知毒力因子和耐药的编码基因，其制剂可显著提高猪肠道中乳酸菌和双歧杆菌等益生菌丰度，显著降低产气荚膜梭菌和大肠杆菌等致病菌的丰度，并显著改善肠道形态结构和屏障功能。CN115975866ACN115975866A权利要求书1/1页1.丁酸梭菌ClostridiumbutyricumSZ，其特征在于，保藏编号为CGMCCNO.24743。2.含有权利要求1所述丁酸梭菌SZ的菌剂。3.丁酸梭菌SZ液态菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)菌种活化；(2)种子液的制备：将活化后的菌种接种于种子培养基中进行厌氧培养；(3)发酵罐扩大培养：将步骤(2)得到的种子液接入发酵培养基中进行厌氧培养，所得发酵液即为液态菌剂。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述种子培养基为：蛋白胨1.0％、酵母粉0.5％、葡萄糖2.0％、氯化钠0.5％和抗坏血酸0.05％，pH7.5±0.1；所述发酵培养基为：蛋白胨1.0％、酵母粉0.5％、葡萄糖2.0％、乳糖0.5％、(NH4)2SO40.1％、NaCl0.5％、K2HPO4·H2O0.4％、MnSO4·H2O0.02％、MgSO4·7H2O0.05％、CaCO30.2％和抗坏血酸0.05％，pH7.5±0.1。5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，步骤(2)和(3)培养的温度为50℃。6.丁酸梭菌SZ固态菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)菌种活化；(2)种子液的制备：将活化后的菌种接种于种子培养基中进行厌氧培养；(3)固态发酵：将步骤(2)得到的种子液接种于固态发酵培养基，同时接入枯草芽孢杆菌和/或酿酒酵母进行混合厌氧发酵。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述固态发酵培养基按质量百分比计为：玉米粉5％、稻壳粉25％、麸皮15％、喷浆玉米皮15％、葡萄糖1.5％、石粉6％、硫酸铵2.5％和水30％。8.权利要求1所述丁酸梭菌SZ或权利要求2所述菌剂或按照权利要求3‑5所述方法制备的液态菌剂或按照权利要求6或7所述方法制备的固态菌剂的以下任一应用：1)用作饲料添加剂；2)用于生产淀粉酶和纤维素酶制剂；3)用于制备改善动物肠道健康的生物制剂。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述动物包括猪。2CN115975866A说明书1/7页丁酸梭菌SZ及其应用技术领域[0001]本发明涉及微生物技术领域，具体地说，涉及丁酸梭菌SZ及其应用。背景技术[0002]丁酸梭菌，又名酪酸梭菌或丁酸梭状芽孢杆菌，是从健康人和动物肠道中分离出的一种厌氧的革兰氏阳性芽孢杆菌，该菌可发酵碳水化合物产生丁酸、乙酸和氢气等代谢产物，因其可形成内生芽孢而具有耐高温、耐胃酸和耐胆盐等抗逆特性，其在改善畜禽肠道健康方面具有重要作用。丁酸梭菌比一般的益生菌具有更显著的优势和市场前景，可作为我国饲料停抗后重要的抗生素替代物之一。[0003]目前生产中使用的丁酸梭菌在特异性专用畜禽来源菌株的筛选、生物学性能和安全性评价与应用等方面仍存在一些问题。生产中筛选获得的丁酸梭菌菌株大部分为异源菌株，缺乏宿主特异性，造成其在特定畜禽肠道定植能力差；不同来源丁酸梭菌菌株生物学功能差异大；不同菌株功能酶基因和特定功能基因表达不清楚；未对使用的丁酸梭菌菌株的安全性进行全基因组序列系统评价，部分菌株存在耐药基因和毒性基因等安全风险。发明