异喹唑啉酮化合物、其制备方法及用途.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN116003416A(43)申请公布日2023.04.25(21)申请号202211325361.4C12P17/18(2006.01)(22)申请日2022.10.27C12R1/69(2006.01)(71)申请人云南中烟工业有限责任公司地址650231云南省昆明市五华区红锦路367号(72)发明人李振杰刘志华代家猛杨光宇刘春波张翼鹏柴金凤施建莲何沛唐石云苏钟璧(74)专利代理机构北京市领专知识产权代理有限公司11590专利代理师陈有业任永利(51)Int.Cl.C07D487/04(2006.01)A01N43/90(2006.01)A01P1/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图7页(54)发明名称异喹唑啉酮化合物、其制备方法及用途(57)摘要本发明属于植物化学技术领域，具体涉及异喹唑啉酮A和B的制备及其在抑制烟草花叶病毒中的用途。所述异喹唑啉酮A和B为同分异构体，即1‑(Z)和2(E)，分子式为：C22H21N3O3，其具有下述结构：本发明还公开了上述化合物的制备方法和用途。本发明的异喹唑啉酮具有很好的抗烟草花叶病毒活性。CN116003416ACN116003416A权利要求书1/1页1.异喹唑啉酮化合物，其特征在于，其为同分异构体，1‑(Z)和2(E)，分子式为：C22H21N3O3，具有下述结构：2.根据权利要求1所述喹唑啉酮化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)浸膏提取：对杂色曲霉菌株YATS1111进行固体发酵，其发酵产物用90wt％～99wt％乙醇超声提取并过滤浓缩，然后加入乙酸乙酯与酒石酸混合液充分搅拌均匀，静置分层后分出水相；水相再用Na2CO3调节pH值，并用乙酸乙酯再次萃取；乙酸乙酯相减压浓缩成浸膏；(2)硅胶柱层析：将步骤(1)得到的浸膏用200～300目硅胶干法装柱进行硅胶柱层析；以体积配比分别为10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5的二氯甲烷‑甲醇溶液进行梯度洗脱，合并相同极性的部分，收集各部分洗脱液并浓缩；其中，所述硅胶与所述浸膏的质量比为1:(2～5)；收集其中用体积比为9:1的二氯甲烷‑甲醇溶液洗脱时得到的洗脱液，称为第一洗脱液；将上述洗脱液用硅胶层析柱继续分离，用体积配比依次为9:1、8:2、7:3、6:4、5:5的二氯甲烷‑丙酮溶液进行梯度洗脱，收集其中用体积比为8:2的二氯甲烷‑丙酮溶液洗脱时得到的洗脱液，称为第二洗脱液；(3)高效液相色谱分离：将步骤(2)得到的第二洗脱液通入高效液相色谱进行分离纯化；所述高效液相色谱法分离纯化采用21.2mm×250mm，5μm的ZorbaxPrepHTGF色谱柱，流速为10mL/min，流动相为52wt％的甲醇水溶液；DAD检测器检测波长为359nm，第三洗脱液每次进样50μL；收集每次进样后色谱峰化合物的保留时间为25.4min和27.8min时所对应的洗脱液，减压除去溶剂即可得到所述的生物碱类化合物纯品。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中使用乙酸乙酯与3wt％～5wt％的酒石酸混合液，水相再用Na2CO3调节pH值至9.0。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，浸膏在经硅胶柱层析粗分前，用二氯甲烷和甲醇混合溶剂(2:1)重量1.5～2.5倍的80～120目硅胶拌样。5.根据权利要求1所述异喹唑啉酮化合物在制备抗烟草花叶病毒药物中的用途。2CN116003416A说明书1/6页异喹唑啉酮化合物、其制备方法及用途技术领域[0001]本发明属于天然产物化学技术领域，具体涉及一种烟草内生杂色曲霉真菌发酵产物中喹唑啉酮生物碱类化合物及其制备方法与应用。背景技术[0002]烟草是茄科烟草属植物，是世界上种植最广泛的经济作物之一。中国是世界上最大的烟草生产国和消费国，年产量可达4～5亿吨。但是对其内生菌的研究还比较少，其内生菌的次生代谢产物及生物活性有待进一步研究。因此，加强烟草内生菌次生代谢产物的综合利用引起了科研工作者的广泛关注。[0003]根据文献报道，目前从烟草中鉴定出的化合物高达4000多种，主要成分包括二萜类化合物、倍半萜类化合物、黄酮类化合物、生物碱、香豆素等。同时有研究证明，烟草内源真菌中分离鉴定的化合物具有不同的药理学作用，如抗菌、抗氧化、抗肿瘤、抗烟草花叶病毒等。因此，加强烟草内生真菌代谢产物研究，对发现活性显著的新骨架类型代谢产物具有重要的科学意义。[0004]曲霉属真菌广泛存在于自然界中。其中，米曲霉是一种能产生复合酶的菌株，该菌株除可产生蛋白酶外，还可产淀粉酶、糖化酶、纤维素酶、植酸酶等多种功能的酶，因而广泛应用于食品、饲料、酿酒等发酵工业。同时，杂色曲霉次生代谢产物也被认为是一个亟