用于产生细胞衍生的微丝网络的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109789167A(43)申请公布日2019.05.21(21)申请号201880003555.8(74)专利代理机构上海专利商标事务所有限公司31(22)申请日2018.04.13100代理人葛臻翼陈扬扬(30)优先权数据62/485,4222017.04.14US(51)Int.Cl.A61K35/36(2015.01)(85)PCT国际申请进入国家阶段日A61K38/17(2006.01)2019.03.15A61L27/60(2006.01)(86)PCT国际申请的申请数据PCT/US2018/0275832018.04.13(87)PCT国际申请的公布数据WO2018/191672EN2018.10.18(71)申请人哈佛学院董事及会员团体地址美国马萨诸塞州(72)发明人T·易G·瓦格纳权利要求书4页说明书19页附图15页(54)发明名称用于产生细胞衍生的微丝网络的方法(57)摘要本发明提供了细胞衍生的微丝网络。还提供了通过在基质支持物和细胞培养基中培养细胞来产生微丝网络的方法，其中细胞增殖并形成聚集的细胞团，其在细胞团外部和周围产生微丝，并且其中细胞外微丝连接并形成连续的细胞外微丝网络；以及用于治疗医学病症以及促进创伤修复和组织再生的方法，其包括将微丝网络施加于需要治疗的区域。CN109789167ACN109789167A权利要求书1/4页1.一种网络，其包括在多个微丝源区域之间以连续格架或网结构互连的细胞衍生的微丝。2.如权利要求1所述的网络，其中，所述微丝是细胞外微丝。3.如权利要求1所述的网络，其中，所述微丝是膜封闭的。4.如权利要求1所述的网络，其中，所述微丝包含肌动蛋白。5.如权利要求4所述的网络，其中，所述肌动蛋白包括β-肌动蛋白。6.如权利要求1所述的网络，其中，所述微丝的长度为约1-1000μm。7.如权利要求1所述的网络，其中，所述微丝是分支的。8.如权利要求7所述的网络，其中，所述微丝具有约2-10个分支。9.如权利要求1所述的网络，其中，多根微丝排列在一起，并形成各种架构结构的束。10.如权利要求1所述的网络，其中，所述微丝源区域形成连续格架或网结构的连接节点。11.如权利要求1所述的网络，其进一步包含粘附材料。12.如权利要求11所述的网络，其中，所述粘附材料与微丝结合并扩大微丝的直径。13.如权利要求1所述的网络，其中，所述网络具有约1μm2至约500cm2的面积和约1nm至约0.5cm的厚度。14.如权利要求1所述的网络，其中，所述网络是单层或多层。15.如权利要求1所述的网络，其中，所述微丝的表面积大于细胞内细胞骨架微丝网络的表面积的当量单位。16.如权利要求1所述的网络，其中，所述网络是多孔的。17.如权利要求16所述的网络，其中，孔径的直径范围是约0.1至5μm。18.如权利要求1所述的网络，其进一步包含生物活性剂和/或无生物活性剂。19.如权利要求18所述的网络，其中，所述生物活性剂是治疗药物。20.如权利要求1所述的网络，其中，所述微丝源区域包含细胞。21.如权利要求1所述的网络，其中，所述网络存在于基质支持物上，其中所述基质支持物是可生物降解的。22.如权利要求1所述的网络，其中，所述网络存在于Matrigel基质支持物上。23.如权利要求1所述的网络，其中，所述网络没有来自细胞的核。24.如权利要求1所述的网络，其中，所述网络没有细胞。25.如权利要求1所述的网络，其中，所述微丝源区域包含具有或不具有遗传修饰的真核细胞。26.如权利要求25所述的网络，其中，所述真核细胞是哺乳动物细胞。27.如权利要求26所述的网络，其中，所述哺乳动物细胞是人类细胞。28.如权利要求27所述的网络，其中，所述人类细胞是人类乳腺上皮细胞。29.如权利要求1所述的网络，其中，所述微丝被包埋于基质支持物的顶部表面。30.如权利要求1所述的网络，其中，所述基质支持物抑制细胞附着和迁移。31.一种制造微丝的网络的方法，所述方法包括以下步骤：在基质支持物和细胞培养基中培养细胞，其中细胞增殖并形成聚集的细胞团，且其中细胞团在细胞团外部和周围产生微丝，且其中细胞外微丝连接并形成连续的细胞外微丝网2CN109789167A权利要求书2/4页络，以及从网络中去除细胞的核和/或细胞。32.如权利要求31所述的方法，其中，所述细胞团形成于基质支持物的顶部。33.如权利要求31所述的方法，其中，所述微丝被包埋于基质支持物的顶部表面。34.如权利要求31所述的方法，其中，所述基质支持物抑制细胞附着和迁移。35.如权利要求31所述的方法，其中，所述微丝是细胞外微丝。36.如权利要求31所述的方法，其中，所述微丝是膜封闭的。37.如权利要求3