一种修饰的聚乙烯亚胺化合物及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106188537A(43)申请公布日2016.12.07(21)申请号201610584829.X(22)申请日2016.07.22(71)申请人四川大学地址610000四川省成都市一环路南一段24号(72)发明人巩长旸吴秦浩魏于全李玲(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569代理人李娜(51)Int.Cl.C08G73/04(2006.01)C12N15/87(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图3页(54)发明名称一种修饰的聚乙烯亚胺化合物及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种修饰的聚乙烯亚胺化合物，由七氟丁酸酐对聚乙烯亚胺中的伯胺氢取代得到，所述聚乙烯亚胺的重均分子量为1.8K，所述聚乙烯亚胺中伯胺氢的摩尔取代比例为5～66.67％。本发明所述的修饰的聚乙烯亚胺化合物细胞毒性低，基因转染率较高于现有产品支化聚乙烯亚胺(重均分子量25000g/mol，PEI25K)、脂质体2000(Lipofectamine2000)，脂质体3000(Lipofectamine3000)，本发明所述的修饰的聚乙烯亚胺化合物可作为优良的基因递送系统。CN106188537ACN106188537A权利要求书1/1页1.一种修饰的聚乙烯亚胺化合物，由七氟丁酸酐对聚乙烯亚胺中的伯胺氢取代得到，所述聚乙烯亚胺的重均分子量为1.8K，所述聚乙烯亚胺中伯胺氢的摩尔取代比例为5～66.67％。2.根据权利要求1所述的修饰的聚乙烯亚胺化合物，其特征在于，所述聚乙烯亚胺中伯胺氢的摩尔取代比例为15～55％。3.权利要求1或2所述的修饰的聚乙烯亚胺化合物的制备方法，包括以下步骤：在催化剂存在的条件下，将七氟丁酸酐和聚乙烯亚胺于甲醇中进行取代反应，得到修饰的聚乙烯亚胺化合物，所述催化剂为三乙胺。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述七氟丁酸酐与聚乙烯亚胺中伯胺基的摩尔比为0.05～0.5：1。5.根据权利要求3所述修饰的聚乙烯亚胺化合物的制备方法，其特征在于，所述取代反应的温度为22～27℃，所述取代反应的时间为40～60h。6.根据权利要求3所述修饰的聚乙烯亚胺化合物的制备方法，其特征在于，所述的催化剂的添加量为七氟丁酸酐与聚乙烯亚胺总重量的0.01～10％。7.根据权利要求3～6任意一项所述修饰的聚乙烯亚胺化合物的制备方法，其特征在于，所述取代反应后还包括：将所述取代反应的产物依次进行透析、过滤和冷冻干燥；所述的透析的截留分子量为15～2500，所述透析的时间为3～6天。8.根据权利要求7所述修饰的聚乙烯亚胺化合物的制备方法，其特征在于，所述过滤采用滤膜进行，所述滤膜孔径为0.4～0.5μm。9.权利要求1或2所述的修饰的聚乙烯亚胺或者由权利要求4～8任意一项所述的制备方法制备得到的修饰的聚乙烯亚胺作为载体构成的基因递送系统，包括载体和负载在所述载体上的基因药物。10.权利要求9所述的基因递送系统在制备基因治疗药物中的应用。2CN106188537A说明书1/5页一种修饰的聚乙烯亚胺化合物及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及基因递送系统领域，尤其涉及一种修饰的聚醚酰亚胺化合物及其制备方法和应用。背景技术[0002]基因治疗主要是将外源性功能基因导入细胞中，以此来修饰或补充生物原有基因序列，改变其蛋白表达，实现疾病治疗目的。但是，外源性功能基因无法主动被靶细胞纳入，需要依靠基因递送系统完成细胞递送。因此制备出能够有效携带功能基因的载体系统，是基因治疗的关键环节。[0003]目前，基因递送系统有两大类：病毒类和非病毒类递送系统。在病毒类递送系统中，常见的病毒转染体系主要包括逆转录酶病毒、腺病毒、慢病毒和单纯疱疹病毒等。虽然病毒递送系统转染率较高，但其制备难度较大、承载基因能力有限，并且存在与宿主基因组整合的潜在致病性危险，从而限制了其在在实验室及临床的应用，并难以大范围推广。非病毒基因递送系统中的阳离子聚合物，可通过静电吸附负电性的核酸大分子，如质粒DNA或者反义寡核苷酸，进而形成微粒、胶束或者脂质体实现基因的高效携带及细胞高效转染。聚乙烯亚胺(PEI)是现有技术常用的阳离子基因转染系统，其可以分为直链型和支链型，并且存在有不同的分子量产品。但由于PEI自身化学结构限制，具有强烈的正电性，在基因转染过程中易引发细胞毒性，造成细胞死亡。发明内容[0004]有鉴于此，本发明的目的在于提供一种修饰的聚乙烯亚胺化合物，作为基因递送系统的载体，以提高基因递送系统的转染率，并降低基因递送系统的细胞毒性。[0005]为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：[0006]本发明提供了一种修饰的聚乙烯亚胺化合物，由七氟丁酸酐对聚乙烯亚胺中的伯胺氢取代