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本发明提出了一种双特异性抗体及其应用,该抗体为双链抗体,包括:第一条肽链,包含CD3单链抗体和第一Fc区,所述CD3单链抗体包括重链可变区、轻链可变区;以及第二条肽链,包含PD?1胞外区和第二Fc区;其中,所述CD3单链抗体的C端与所述第一Fc区的N端相连,所述PD?1胞外区的C端与所述第二Fc区的N端相连。本发明所制备的双特异性抗体能同时靶向CD3和PD?L1,从而介导T细胞对肿瘤细胞的杀伤,具有较强的肿瘤抑制能力。