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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112263676A(43)申请公布日2021.01.26(21)申请号202011095181.2B82Y5/00(2011.01)(22)申请日2020.10.14B82Y40/00(2011.01)(71)申请人上海长海医院地址200433上海市杨浦区长海路168号(72)发明人许传亮李威薛永平何星刘安伟熊巧曾蜀雄戴利和应毅蝶陶万茹(74)专利代理机构上海怡恩专利代理事务所(普通合伙)31336代理人潘青青(51)Int.Cl.A61K39/395(2006.01)A61K47/59(2017.01)A61P35/00(2006.01)A61K49/00(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图3页(54)发明名称一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇、制备方法及应用(57)摘要本发明公开了一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇、制备方法及应用,其技术方案要点是:双靶向纳米团簇,由多个巯基化的抗CD47和PD‑L1抗体通过MAL‑PEG‑SCM偶联到支化型聚乙烯亚胺上;双靶向纳米团簇的制备方法,具体包括以下步骤:S1、通过Traut's试剂分别将抗CD47抗体和抗PD‑L1抗体实现巯基化;S2、用异官能团修饰剂MAL‑PEG‑SCM修饰分子量为750kDa的支化型PEI,获得PEI‑MAL‑PEG‑SCM溶液;S3、用巯基化的抗CD47和PD‑L1抗体与PEI‑MAL‑PEG‑SCM溶液混合反应,制备得到双靶向纳米免疫团簇;本发明所采用的是抗CD47和PD‑L1抗体,既能充分发挥不同抗体抗原结合的联合作用,而且具有更好的普适性,其抗原结合能力良好,荧光标记后可用于膀胱癌的诊断。CN112263676ACN112263676A权利要求书1/1页1.一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇,其特征在于:由多个巯基化的抗CD47和PD-L1抗体通过MAL-PEG-SCM偶联到支化型聚乙烯亚胺上。2.根据权利要求1所述的一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇,其特征在于:所述双靶向纳米免疫团簇中的骨架为聚乙烯亚胺PEI,铰链为马来酰亚胺-聚乙二醇-琥珀酰亚胺MAL-PEG-SCM。3.根据权利要求1所述的一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇,其特征在于:所述双靶向纳米免疫团簇中所含的抗体为抗CD47抗体和抗PD-L1抗体。4.根据权利要求1所述的一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇,其特征在于:所述双靶向纳米免疫团簇为树枝状,尺寸为100-200nm。5.一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇的制备方法,其特征在于:具体包括以下步骤:S1、通过Traut's试剂分别将抗CD47抗体和抗PD-L1抗体实现巯基化;S2、用异官能团修饰剂MAL-PEG-SCM修饰分子量为750kDa的支化型PEI,获得PEI-MAL-PEG-SCM溶液;S3、用巯基化的抗CD47和PD-L1抗体与PEI-MAL-PEG-SCM溶液混合反应,制备得到双靶向纳米免疫团簇。6.根据权利要求5所述的一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇的制备方法,其特征在于:所述S1中将抗CD47抗体、抗PD-L1抗体溶液与Traut’s试剂分别按照摩尔比(1-2):(18-22)的比例在氮气环境下室温避光反应1h,并在MWCO3.5kDa透析袋室温透析30min,获得巯基化抗体aCD47-SH和aPD-L1-SH。7.根据权利要求5所述的一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇的制备方法,其特征在于:所述S2中将PEI溶液与MAL-PEG-SCM溶液按照质量比1:27室温避光反应48h,并在MWCO3.5kDa透析袋室温透析12h,得到PEI-MAL-PEG-SCM溶液。8.根据权利要求6或7所述的一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇的制备方法,其特征在于:将PEI-MAL-PEG-SCM、aCD47-SH、aPD-L1-SH按照摩尔比1:3000:3000的比例在氮气条件下4℃避光反应12h,用MWCO300kDa透析袋室温透析12h,获得的保留液即为双靶向纳米免疫团簇。9.一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇的应用,其特征在于:应用于膀胱癌的诊断和治疗。2CN112263676A说明书1/5页一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇、制备方法及应用技术领域[0001]本发明涉及生物医药领域,特别涉及一种用于膀胱癌诊断与治疗的双靶向纳米团簇、制备方法及应用。背景技术[0002]膀胱癌是全球第十大最常见的癌症和我国发病率最高的泌尿系统恶性肿瘤。膀胱癌具有复发、进展率高,临床预后差的显著特点。PD-L1是肿瘤细胞表面“找不到我”的信号,是一种适应性免疫检查点,而CD4