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本案涉及一种基于苝酰亚胺的FRET乏氧酶荧光探针、其制备方法及应用,该材料以苝酰亚胺为主体发光单元、偶氮衍生物作为修饰基团、BODIPY作为分子内能量给体,构筑分子内FRET分子,具有如下结构式:其中,R1为H或?N((CH2)mCH3)2,m为2~10的整数;R2为长链烷基。本发明所制备的乏氧酶材料首次把偶氮基团修饰到苝酰亚胺衍生物上,通过简要的步骤引入到苝酰亚胺上、制备了光稳定性好、对乏氧酶选择性识别明显、抗干扰能力强的系列乏氧酶苝酰亚胺类荧光材料,针对细胞中的偶氮还原酶有强烈的吸收和荧光响应,可实现对肿瘤细胞中的乏氧酶实现双重信号检测。