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本发明提供一种乏氧荧光成像探针及其制备方法和应用,所述乏氧荧光成像探针具有式I所示结构,命名为:1?(1?(2?硝基咪唑)?3?[(4?氨甲基)氮杂环己烷]?2?丙醇)?6?(4?硝基苯并?2?氧杂?1,3?二唑)?赖氨酸,简称PLN;本发明的探针可以通过硝基咪唑基团实现该探针对不同乏氧环境中细胞内的大分子结合不同来实现对乏氧细胞的特异性荧光成像,分子中的伯氨基有利于该分子的进一步修饰。