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本发明公开了一种透明质酸四糖和六糖的分离方法,属于生物工程技术领域。本发明采用Q?Sepharose?fast?flow为离子交换剂,pH8~9Tris-HCl为平衡液,pH80.125M的NaCl线性梯度洗脱,可将透明质酸四糖和六糖进行分离,脱盐后即得透明质酸四糖和六糖纯品。