质粒DNA提取试剂盒-一步式.doc

技术咨询电话：400-607-9999注意：本制品仅供研究使用，请勿用于临床治疗等其他用途质粒DNA提取试剂盒-一步式One-StepPlasmidDNAout2.0货号:M090111产品及特点本产品是在本公司一步裂解式质粒DNAOUT（CAT#M090112）基础上开发的、能够快速从100mL左右的E.coli培养液中取质粒DNA的产品。它只需要一种溶液即可以完成细菌裂解，并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。它比经典的碱变性质粒制备方法更加快捷和方便。本产品的主要特点是：快速，整个质粒DNA提取过程只需要不到30分钟，比传统的碱变性方法快捷。超螺旋比例高，独创的非碱法一步式细菌裂解技术，避免了强碱对DNA的损害，得到的质粒DNA切口更少。DNA纯度高，几乎没有基因组DNA和RNA污染，OD260/280一般在1.7-1.9之间。DNA可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆等实验。最大吸附量为600ugDNA，具体产率取决于质粒拷贝数。过程简单，重复性和稳定性好。规格及成分成份5次包装溶液A100mL大离心吸附柱5套通用预洗液100mL通用洗柱液100mL通用洗脱液10mL使用手册1份运输及保存常温保存，4℃保存，有效期一年。使用方法1.用50mL离心管分数次收集10-100mL新鲜的菌液，一般可以5000rpm离心10分钟，去除上清即得细菌沉淀。往细菌沉淀中加入20mL溶液A，充分振荡悬浮或吹打混匀。注意：充分重悬细胞沉淀（无块状物）对于获得高的质粒产量十分重要。将裂解液全部转移到大离心吸附柱中，放入到配套的收集管中。6000rpm离心5-10分钟，弃穿透液。离心过滤柱将吸附溶液中的质粒DNA，而将基因组DNA和杂质在穿透液中。如果离心吸附柱中还有未离心下去的裂解液，可以适当延长离心时间直到离心吸附柱中没有残留液体。将10mL通用预洗液加入到离心吸附柱中，室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，弃穿透液。重复上步一次。将10mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，弃穿透液。重复上步一次。室温6000rpm空甩5分钟，弃穿透液。注意：此步很重要，不能跳过。将离心吸附柱放入一个自备的、干净的50mL塑料离心管中，加1mL通用洗脱液（洗脱液如加热到50-65℃效果更佳），室温静置2分钟后6000rpm离心5分钟，收集液即是质粒DNA溶液。重复上步1次以便洗脱更多的质粒DNA。合并所得质粒DNA，立即使用或-20℃储存。注意事项细菌培养时间一般为12-16小时，但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒DNA突变。菌体过多会造成裂解液粘稠透，需要充分吹打，否则容易堵塞离心柱。通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次，否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。一般1.5mL过夜培养菌体可收获约10ug高拷贝质粒。从生长旺盛的细菌中纯化的质粒在电泳中表现为2-3条带有时甚至为4-6条带均属正常，它们就是还未来得及分开的相套的质粒，易被误判为基因组DNA。