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本发明公开了一种内标辅助花瓣状SERS纳米探针及其制备方法、应用,其中,本发明的内标辅助花瓣状SERS纳米探针是由金纳米球内核、内标修饰分子、花瓣状金纳米外壳和识别分子4?硝基苯硫酚构成的核?分子?壳结构的金纳米花探针;内标修饰分子是具有腈基、炔基或叠氮官能团的拉曼信号分子。本发明以拉曼信号分子作为内标修饰分子修饰在金纳米球内核上,校正后的工作曲线重现性好,误差小,提高了检测结果的可靠性;通过内标修饰分子的分子层上生长一层花瓣状金纳米外壳提高了SERS基底内部和外部的SERS活性,并且花瓣状外壳增加了SERS基底的表面积。另外,本发明的识别分子能够实现硫化氢的比率拉曼检测,有效降低背景信号的干扰,提高了检测灵敏度。