尼古丁诱导LMP1抑制NESG1促进鼻咽癌侵袭转移.doc

尼古丁诱导LMP1抑制NESG1促进鼻咽癌侵袭转移研究背景与目的鼻咽癌是中国及东南亚国家最普遍的恶性肿瘤之一,现普遍认为鼻咽癌的发病与饮食、EB病毒暴露和基因等因素有关。LMP1是EB病毒相关的编码蛋白,它经常被报道对EB病毒相关癌症,包括鼻咽癌有促癌作用,LMP1可通过调节各种信号通路促进鼻咽癌细胞侵袭转移。在最近的一项研究中,吸烟被认为可能是鼻咽癌发生发展的非病毒性危险因素。而尼古丁是烟草的主要成分,已被证实可导致癌症的增殖、凋亡、转移和化疗。α7nAChR是烟碱乙酰胆碱受体的16个不同亚单位之一,它主要在气道中表达,对调节尼古丁的作用很重要。然而,尼古丁诱导鼻咽癌转移的分子机制尚不清楚。NESG1是特异性表达在鼻咽上皮的抑癌基因,在鼻咽癌组织中明显低表达,可作为鼻咽癌患者不良预后的预示分子,而它在鼻咽癌中的具体分子机制仍不明确。文献报道miR-1254在多个肿瘤中可以作为抑癌分子抑制肿瘤的发生发展,但在鼻咽癌中的分子作用机制尚未清楚。本研究旨在为鼻咽癌的侵袭转移发病过程提供一种新的分子机制研究。研究方法通过RT-qPCR和原位杂交实验检测正常鼻咽黏膜组织及鼻咽癌组织标本中miR-1254、HDGF及NESG1的表达水平,进一步结合了统计学方法分析了miR-1254在鼻咽癌组织中的表达以及与鼻咽癌患者病理参数及其预后的相关性。构建稳定过表达miR-1254及其阴性对照组鼻咽癌细胞株,分别进行了检测细胞侵袭转移能力的Transwell、Boyden和划痕实验,以及裸鼠肝包膜转移瘤模型实验验证过表达miR-1254细胞在体内侵袭转移能力的改变,利用Westernblotting实验分析了miR-1254、HDGF/DDX5复合物、NESG1、尼古丁和LMP1的调控通路。分别利用microRNA芯片和荧光素酶报告基因实验检测了NESG1调控的microRNA和miR-1254的靶基因。我们分别使用ChIP、EMSA实验和Co-IP实验验证DNA与蛋白和蛋白与蛋白之间的相互作用。研究结果我们观察到作为肿瘤转移抑制基因的miR-1254通过下调HDGF/DDX5/β-catenin/TCF4/ZEB1的反馈环路,抑制上皮间充质转化(EMT)信号进而抑制了鼻咽癌的转移。此外,我们观察到miR-1254灭活HDGF/DDX5/β-catenin/c-Myc介导的转录抑制,并形成一个反馈回路诱导其自我表达。此外,NESG1通过抑制PI3K/Akt/c-Myc通路诱导miR-1254的表达,通过下调NESG1/c-JUN复合物介导的NESG1启动子转录抑制刺激其自身表达,进一步降低了EMT信号,抑制了鼻咽癌的迁移和侵袭。最后,我们观察到尼古丁通过诱导α7nAchR/NF-Kb信号诱导LMP1,进一步逆转了NESG1介导的miR-1254/HDGF/DDX5/β-catenin/TCF4/ZEB1/c-Myc/c-JUN复杂信号网络,促进鼻咽癌转移。在临床样本中,作为不良预后因子的miR-1254与HDGF的表达呈负相关,与NESG1呈正相关。研究结论尼古丁在鼻咽癌中可通过LMP1调控NESG1/MIR-1254/HDGF/DDX5/β-catenin/TCF4/Zeb1/C-Myc/C-Jun复杂信号网络。