出生前DEHP暴露对雌性子代大鼠生殖系统发育的影响.doc

出生前DEHP暴露对雌性子代大鼠生殖系统发育的影响目的探讨出生前暴露邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对子代雌性大鼠生殖系统发育的影响及其作用机制。方法性成熟SPF级Sprague-Dawley大鼠,按雌雄1:1合笼交配。若受孕,从此日起定为G0,每日称量孕鼠体重并观察孕鼠饮食摄水情况。将获得的40只孕鼠按体重随机分为溶剂对照组(玉米油)以及2mg/kg、10mg/kg、50mg/kg三个剂量组,每组10只。孕鼠自G14~G19连续灌胃染毒,灌胃体积为1ml/100g体重。F1代子鼠出生后第一天定为PND0,记录新生鼠体重、肛门生殖器距离(AGD)、各窝产仔数和性别比以及是否存在死胎、畸胎情况。F1代子鼠出生后第21天断乳,断乳后雌雄分笼饲养,每周测量雌性大鼠体重。雌性子代大鼠分笼饲养后,每日检查其阴道是否开口,以阴道开口日龄作为青春期开始的标志。雌性大鼠阴道开口后,每日观察阴道脱落细胞形态学变化并记录雌鼠动情周期。F1代雌性大鼠饲养至70日龄左右,于动情间期称重、测量AGD后断头处死并取血分装血清,称量子宫以及卵巢湿重并计算脏器系数。采用放射免疫法检测雌性大鼠血清甾体激素睾酮(T)、雌二醇(E2)、孕酮(P)以及促性腺激素黄体生成素(LH)水平。取卵巢组织提取mRNA,实时荧光定量PCR检测大鼠卵巢组织中PPARγ、StAR、P450arom、P450scc、3β-HSD、17β-HSDI、17β-HSDIImRNA表达水平。结果(1)各处理组间孕鼠饮水摄食情况未见异常,体重增量与孕期无统计学差异(P>0.05)。未见死胎、畸胎。各窝产仔数以及性别比无统计学差异(P>0.05)。(2)各处理组间F1代雌性大鼠出生时体重存在统计学差异(P<0.01),与对照组相比,10mg/kg、50mg/kg剂量组雌性大鼠出生时体重降低;各剂量组间两两比较,2mg/kg剂量组分别与10mg/kg以及50mg/kg剂量组间有统计学差异(P<0.05),2mg/kg剂量组雌性大鼠出生时体重高于10mg/kg以及50mg/kg剂量组。各处理组间F1代雌性大鼠出生时AGD无统计学差异(P>0.05)。(3)各处理组间F1代雌性大鼠出生后至哺乳期体重存在统计学差异(P<0.001);各处理组间F1代雌性大鼠青春期前体重存在统计学差异(P<0.05),与对照组相比,2mg/kg剂量组雌性大鼠体重升高(P<0.05),50mg/kg剂量组降低(P<0.05);各处理组间F1代雌性大鼠青春期至性成熟期体重存在统计学差异(P<0.05),与对照组相比,50mg/kg剂量组雌性大鼠体重降低(P<0.05);各处理组间F1代雌性大鼠性成熟期后体重没有统计学差异(P>0.05)。(4)各处理组间F1代雌性大鼠阴道开口时间无统计学差异(P>0.05)。各处理组间F1代雌性大鼠动情周期异常率有统计学差异(P<0.05),与对照组相比,50mg/kg剂量组长期停留在动情间期的雌性大鼠数量增多。(5)各处理组间F1代雌性大鼠子宫、卵巢脏器系数无统计学差异(P>0.05)。(6)各处理组间F1代雌性大鼠血清孕酮水平存在统计学差异(P<0.05),与对照组比较,10mg/kg剂量组F1代雌性大鼠血清孕酮水平升高(P<0.05);各剂量组间比较,10mg/kg剂量组F1代雌性大鼠血清孕酮水平大于2mg/kg剂量组(P<0.05)。各处理组间F1代雌性大鼠血清雌二醇水平无统计学差异(P>0.05)。各处理组间F1代雌性大鼠血清睾酮水平存在统计学差异(P<0.05),与对照组比较,10mg/kg剂量组F1代雌性大鼠血清睾酮水平升高(P<0.05);各剂量组间比较,10mg/kg剂量组F1代雌性大鼠血清睾酮水平大于2mg/kg剂量组(P<0.05)。各处理组间F1代雌性大鼠血清促性腺激素黄体生成素水平无统计学差异(P>0.05)。(7)各处理组间F1代雌性大鼠卵巢组织中PPARγ、StAR、P450arom、P450scc、3β-HSD、17β-HSDI、17β-HSDIImRNA表达水平无统计学差异(P>0.05)。结论(1)出生前暴露DEHP可干扰子代雌性大鼠胚胎发育,引起雌性大鼠出生时体重降低;(2)出生前暴露DEHP可干扰子代雌性大鼠的动情周期,改变血清中性激素P和T水平。(3)出生前暴露DEHP可能具有低剂量效应;(4)在本研究条件下出生前DEHP暴露未改变雌性大鼠卵巢与性激素合成通路相关基因的表达水平,相关机制还需进一步研究。