出生前DEHP暴露对大鼠下丘脑及生殖腺GnRH及GnRHR表达的影响.doc

出生前DEHP暴露对大鼠下丘脑及生殖腺GnRH及GnRHR表达的影响目的探讨出生前暴露于邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对子代雌雄鼠生殖神经内分泌系统的影响及其作用机制。方法将成功受孕的32只孕鼠随机分为溶剂对照组(玉米油)以及2mg/kg、10mg/kg、50mg/kgDEHP三个剂量组,每组8只。自G14~G19进行连续灌胃染毒。随机选取48只子代新生鼠,于出生后24小时内称重、断头处死后取下丘脑,提取RNA。其余子代大鼠继续饲养至出生后第21天断乳,断乳后雌雄鼠分笼饲养。子代鼠饲养至约70日龄时,从每窝中随机选择雌雄鼠各1只、每组雌雄鼠各8只,将动情间期的雌鼠和雄鼠断头处死,取下丘脑及卵巢、睾丸,随后提取RNA并进行逆转录。另外,再随机选取子代70日龄雌雄大鼠共48只,雌雄各半,每组6只,心脏灌注多聚甲醛后取下丘脑行组织切片。对新生鼠下丘脑、成年雌雄大鼠下丘脑和生殖腺GnRH及GnRHR基因进行实时荧光定量PCR检测,以及使用免疫荧光法检测成年雌雄大鼠下丘脑GnRH十肽表达情况。结果(1)方差分析结果显示,与对照组相比,新生雌鼠下丘脑GnRH及GnRHR基因相对表达水平在各组间的改变无统计学意义(P>0.05);新生雄鼠下丘脑GnRH基因相对表达水平在各个处理组间的差异无统计学意义(P>0.05),而新生雄鼠下丘脑GnRHR基因在2mg/kg、10mg/kg剂量组GnRHR基因相对表达水平升高,与对照组比较差异具有统计学意义((P<0.05);(2)统计分析结果显示,子代雌性大鼠下丘脑POA区GnRH及GnRHR基因相对表达水平在各处理组的差异无统计学意义(P>0.05);子代雄性大鼠下丘脑GnRHR基因相对表达水平具有统计学意义,与对照组相比,2mg/kg、10mg/kg、50mg/kg三个剂量组的子代雄性大鼠下丘脑GnRHR基因相对表达水平均有下降((P<0.05);(3)子代成年雌鼠及雄鼠下丘脑GnRH肽的平均光密度在各组间的差异无统计学意义(P>0.05);(4)2mg/kgDEHP处理组的子代成年雌鼠卵巢GnRH基因相对表达水平升高,与对照组相比差异有统计学意义((P<0.05),而GnRHR基因相对表达水平组间差异无统计学意义(P>0.05);子代成年雄鼠睾丸GnRH及GnRHR基因相对表达水平组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论(1)在本研究条件下,未发现出生前各剂量DEHP暴露影响子代新生鼠及成年鼠下丘脑GnRH基因表达,也未发现其影响成年鼠下丘脑GnRH肽的表达;在HPG轴的下丘脑水平,出生前短期低剂量DEHP暴露上调了新生雄鼠、下调了成年雄鼠的GnRHR基因表达水平,对雄性的生殖健康存在潜在影响;(2)本实验染毒剂量下,出生前DEHP暴露对子代大鼠的影响存在性别差异性;(3)出生前DEHP暴露对成年子代雌鼠卵巢的作用可能存在低剂量效应,但未影响雄鼠睾丸;相关机制尚需进一步研究。