丙泊酚对小鼠脾源性树突状细胞的影响及其受体机制的研究.doc

丙泊酚对小鼠脾源性树突状细胞的影响及其受体机制的研究目的:本次实验旨在观察丙泊酚对正常脾源性树突状细胞和脂多糖激活后树突状细胞的分化及表面分子MHCII和CD80的影响,同时从脂多糖(LPS)-Toll样受体4(TLR4)通路和神经内分泌免疫网络(β1肾上腺素能受体通路)两个角度初步探索其可能存在的相关受体机制,进一步明确丙泊酚的免疫调节特性和抗炎作用,从而为丙泊酚在危重病人中的合理应用提供一定的实验基础和理论参考。方法:本次实验的研究靶点是小鼠脾源性的树突状细胞,本次实验主要应用的检测技术是流式细胞术。具体方法如下:1本次实验使用的动物是6到8周的雄性BALB/c小鼠,体重20±1克。采用颈椎离断法将小鼠处死,当即无菌下取出小鼠脾脏,采用小鼠淋巴细胞分离液法制备小鼠脾源性单个核细胞悬液,之后采用磁珠分选的方法获得小鼠脾源性树突状细胞。2实验分为四组,即正常对照组;丙泊酚刺激组(5,10和20ug/ml);脂多糖(1ug/ml)刺激组和1ug/ml脂多糖+丙泊酚(5,10和20ug/ml)刺激组。树突状细胞被均匀种植在48孔培养板中,实验分在两个培养板同时进行,其中一个培养板主要包含正常对照组,单纯丙泊酚(5,10和20ug/ml)处理组以及脂多糖刺激组;另外一培养板主要进行的是正常对照组,脂多糖组以及脂多糖刺激1小时之后加入不同浓度丙泊酚(5,10和20ug/ml)刺激组。按照以上分组的情况分别向细胞中加入对应的刺激剂进行干预。将培养板放入无菌CO2培养箱中进行细胞培养。3经过8小时之后,将细胞培养板中的细胞进行分离和提取。之后主要通过流式细胞技术进行检测和分析,观察比较不同组别之间小鼠脾源性树突状细胞的分化情况、共激分子CD80和表面分子MHCII类分子的表达水平以及相关受体(TLR4和β1肾上腺素能受体)的表达情况。结果:正如所参照的文献中描述的一样,小鼠脾源性树突状细胞在抗CD11c-APC和CD45RB-PE标染后通过流式检测分成了CD11chighCD45RBlow树突状细胞,CD11clowCD45RBhigh树突状细胞和CD11clowCD45RBlow树突状细胞三个亚群。其中CD11chighCD45RBlow树突状细胞就是我们所熟知的传统树突状细胞,而CD11clowCD45RBhigh树突状细胞则被称为调节性树突状细胞,在免疫应答中主要发挥负向免疫调控的作用。单纯丙泊酚刺激组的结果显示:与正常对照组相比,临床相关浓度的丙泊酚(5ug/ml和10ug/ml)对树突状细胞分化的影响不具有统计学意义。当丙泊酚的剂量较大时(本次实验使用浓度为20ug/ml)明显降低了CD11chighCD45RBlow树突状细胞的比例(P<0.05)同时升高了CD11clowCD45RBhigh树突状细胞的比例(P<0.05)。脂多糖刺激组与正常对照组相比,CD11chighCD45RBlow树突状细胞的比例升高(P<0.05);而CD11chighCD45RBlow树突状细胞的比例变化没有统计学意义。脂多糖+丙泊酚刺激组与单纯脂多糖(1ug/ml)刺激组相比,研究发现1ug/ml脂多糖+5ug/ml丙泊酚刺激对树突状细胞分化的影响较单纯脂多糖刺激组而言差别不具有统计学意义;然而脂多糖刺激1小时后分别加入10ug/ml和20ug/ml的丙泊酚进行干预,二者均降低了CD11chighCD45RBlow树突状细胞的比例(P<0.05),并且CD11chighCD45RBlow树突状细胞比例下降的程度在脂多糖(1ug/ml)+丙泊酚(10ug/ml)刺激组中不如在1ug/ml脂多糖+20ug/ml丙泊酚刺激组中明显(P<0.05)。此外,脂多糖刺激组与正常对照组相比,共激分子CD80,表面分子MHCII类分子,TLR4和β1肾上腺素能受体的表达水平明显升高(P<0.05)。然而在脂多糖刺激1小时后加入不同浓度丙泊酚进行刺激的组别中发现,脂多糖(1ug/ml)+丙泊酚(5ug/ml)刺激组中共激分子CD80,表面分子MHCII类分子,TLR4和β1肾上腺素能受体的表达水平与单纯脂多糖刺激组相比差别不具有统计学意义;而在脂多糖(1ug/ml)+丙泊酚(10和20ug/ml)刺激组中这些指标的表达水平明显下降(P<0.05),并且在1ug/ml脂多糖+20ug/ml丙泊酚刺激组中下降的更为显著(P<0.05)。结论:120ug/ml丙泊酚明显抑制树突状细胞的正向免疫细胞分化,同时促进负向免疫细胞分化,诱发免疫抑制。210ug/ml丙泊酚能够对抗脂多糖诱发的树突状细胞炎性分化和表型变化。3丙泊酚对树突状细胞的影响可能与TLR4通路和(或)β1肾上腺素能受体通路有关。