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本发明公开了一种可注射、光交联脱细胞基质复合水凝胶及其制备方法与应用,所述制备方法包括以下步骤:(1)将脱细胞基质粉末与酸性胃蛋白酶溶液混合,搅拌处理,去除未消化的基质颗粒得到脱细胞基质预成胶溶液;(2)对脱细胞基质预成胶溶液进行预冷处理,加入碱性溶液,调节pH至7.0?7.4;(3)将聚乙二醇二丙烯酸酯、光引发剂溶解于预冷的缓冲溶液中,再与步骤(2)中预成胶溶液在0~8℃下搅拌均匀,光交联固化得到所述脱细胞基质复合水凝胶。上述制备方法简单、可操作性强,制备得到的复合水凝胶力学强度高、降解时间长、生物相容性好;可用于负载生长因子,注射生物体内后再光照交联,实现生长因子在生物体内的可持续释放,促进组织修复与再生。