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本发明公开了一种火麻油佐剂灭活疫苗的制备方法,包括(1)油相制备、(2)水相制备及(3)乳剂制备,所述油相制备的过程为:在搅拌状态下向火麻油中加入乳化剂,均匀混合后,高压灭菌冷却,获得油相,其中乳化剂占火麻油的体积浓度为5.5%~6.5%。本发明利用火麻油作为佐剂制备动物灭活疫苗,在动物中使用,可以有效改善疫苗产品质量、消除副作用和肌体残留,解决了动物的安全生产和畜禽产品质量安全问题。