一种副猪嗜血杆菌病灭活疫苗新佐剂的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105833267A(43)申请公布日2016.08.10(21)申请号201610289531.6(22)申请日2016.05.04(71)申请人龙岩学院地址364000福建省龙岩市新罗区东肖镇龙岩学院(72)发明人李晓华杨小燕邱龙新郑新添陈进境(74)专利代理机构厦门市新华专利商标代理有限公司35203代理人朱凌(51)Int.Cl.A61K39/39(2006.01)A61K39/102(2006.01)A61P31/04(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图2页(54)发明名称一种副猪嗜血杆菌病灭活疫苗新佐剂的制备方法(57)摘要本发明涉及一种副猪嗜血杆菌病灭活疫苗新佐剂的制备方法，包括以下步骤：(1)分离提取菌株并制备菌液抗原；(2)制备疫苗原液；(3)制备疫苗成品：选取银杏叶提取物为佐剂，制备得到不同浓度成份含量的银杏叶多价灭活疫苗。本发明从传统中草药银杏科植物中分离、提取并制备佐剂有效组份多糖类物质，再与猪副嗜血杆菌多价灭活疫苗相结合，制备出猪副嗜血杆菌银杏叶佐剂灭活疫苗，具有很好的免疫调节功能，能调节淋巴细胞、吞噬细胞活性、调节机体血清中细胞因子水平等，具有天然、低毒、无药物残留等优点。CN105833267ACN105833267A权利要求书1/1页1.一种副猪嗜血杆菌病灭活疫苗新佐剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)分离提取菌株并制备菌液抗原；(2)制备疫苗原液；(3)制备疫苗成品：选取银杏叶提取物为佐剂，制备得到不同浓度成份含量的银杏叶多价灭活疫苗。2.如权利要求1所述副猪嗜血杆菌病灭活疫苗新佐剂的制备方法，其特征在于：在2mL/头的免疫剂量中，佐剂的量为2.5mL-12.5mL。3.如权利要求1所述副猪嗜血杆菌病灭活疫苗新佐剂的制备方法，其特征在于：所述的银杏叶提取物原液每毫升含提取物40mg，其中含银杏黄酮苷9.6mg和萜类内酯2.4mg。4.如权利要求1-3任一权利要求所述副猪嗜血杆菌病灭活疫苗新佐剂的制备方法，其特征在于：所述的银杏叶多价灭活疫苗分别在仔猪15日龄通过颈部肌肉注射2mL，首免21天后试验组仔猪进行第二次免疫，免疫途径和剂量同首免，二免后14天后，对试验组仔猪用的副猪嗜血杆菌杆菌血清4型和5型进行攻毒，同时，分别在攻毒前后采抗凝血用于T细胞亚群流式检测。5.如权利要求4所述副猪嗜血杆菌病灭活疫苗新佐剂的制备方法，其特征在于：所述的攻毒方式为腹腔注射菌液3ml/头，4型和5型活菌含量均为7.5×109CFU，各组分别在免疫前及二免后第7、14天及攻毒后第7、14天采血，4℃4000r/min离心25min分离血清-70℃冷冻保存备用。2CN105833267A说明书1/4页一种副猪嗜血杆菌病灭活疫苗新佐剂的制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种副猪嗜血杆菌病灭活疫苗新佐剂的制备方法，属于药物制品的技术领域。背景技术[0002]传统疫苗多以铝胶、矿物油、蜂胶为疫苗佐剂，铝盐在许多情况下并不是一个好的佐剂，尤其是在诱导细胞免疫应答上。当铝佐剂通过皮下或皮肤内注射而不是肌肉内注射的路径时通常会产生肉芽肿。另外一个副作用就是增加了IgE的产生、变态反应和可能的神经毒性。矿物油佐剂由于存在不能被代谢的缺点，因此会产生一系列的副作用：包括注射部位的炎症反应、肉芽肿、溃疡和发热等。另外，矿物油以及其中的组分如姥鲛烷、正十六烷等会引起佐剂型关节炎等自身免疫反应。因此，矿物油乳佐剂毒性较大。蜂胶具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、消炎、增强机体免疫功能和促进组织再生的作用，以之作为佐剂，可以激发有效的细胞免疫，可以克服常规灭活疫苗不能有效激发细胞免疫的弱点。但蜂胶提取方法对其活性的影响很大，不同溶剂和提取方法所提取的成分差异很大。同时蜂胶成分取决于来源和植物区系，成分的多样性对其在药用应用以及质量标准化造成很大的障碍。这就为进一步研究其作用机制增加了难度，也为蜂胶佐剂的应用推广造成影响。同时，蜂胶的免疫调节作用呈现一定的量效关系，小剂有免疫增强作用，而大剂量有免疫抑制作用。因此要研究其作为佐剂的有效成分的佐剂配比。由于蜂胶成分复杂，影响活性的因素多，还有一些机制还需要继续探明。[0003]有基于此，提出本发明。发明内容[0004]针对现有技术的上述技术问题，本发明的目的是提供一种副猪嗜血杆菌病灭活疫苗新佐剂的制备方法，从传统中草药银杏科植物中分离、提取并制备佐剂有效组份多糖类物质，再与猪副嗜血杆菌多价灭活疫苗相结合，制备出猪副嗜血杆菌银杏叶佐剂灭活疫苗，具有很好的免疫调节功能，能调节淋巴细胞、吞噬细胞活性、调节机体血清中细胞因子水平等，具有天然、低毒、无药物残留等优点。[0005]为达到上述目的，本发明是通过以下技术