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本发明涉及补肾益精丸指纹图谱检测方法、对照指纹图谱和应用。所述方法采用配备有二极管阵列检测器的超高效液相色谱仪进行检测,色谱条件如下:色谱柱为WatersACQUITYUPLCHSST3,2.1mm×100mm,1.8μm,WelchUltimateUPLCXB?C18,2.1mm×150mm,1.8μm,或WelchUltimateUPLCAQ?C18,2.1mm×150mm,1.8μm,柱温25℃?35℃;流速0.25mL·min?1?0.35mL·min?1;检测波长325nm;进样量1?3μL;流动相:甲醇(A)?0.1%甲酸水溶液(B);梯度洗脱。所得补肾益精丸对照指纹图谱可以用于进行补肾益精丸的质量控制。