逍遥丸的指纹图谱检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114113356A(43)申请公布日2022.03.01(21)申请号202010899581.2G01N30/32(2006.01)(22)申请日2020.08.31G01N30/34(2006.01)G01N30/74(2006.01)(71)申请人南京海昌中药集团有限公司地址210061江苏省南京市江北新区永锦路12号申请人江苏海昇药业有限公司(72)发明人金俊杰蔡宝昌胡玉凯李国维刘昊朋(74)专利代理机构南京经纬专利商标代理有限公司32200代理人陆志斌(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/30(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图2页(54)发明名称逍遥丸的指纹图谱检测方法(57)摘要本发明公开了逍遥丸的指纹图谱检测方法，该方法包括：步骤1、逍遥丸供试品溶液的制备；步骤2、混合对照品溶液的制备；步骤3、分别精密吸取供试品与对照品溶液注入液相色谱图仪，记录色谱图；步骤4、将逍遥丸的指纹图谱仪器导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，选择不同批次逍遥丸的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰，用平均值计算法生成逍遥丸的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间、相对峰面积。本发明所研究的逍遥丸指纹图谱，能全面、客观地评价逍遥丸的质量。本发明提供的检测方法具有稳定性好、准确度高、重复性好、精密度高等优点。CN114113356ACN114113356A权利要求书1/2页1.一种逍遥丸的指纹图谱检测方法，其特征在于，它包括以下步骤：步骤1、逍遥丸供试品溶液的制备：取逍遥丸样品适量，研细，粉末过筛，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，浸渍后超声处理，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，经0.45µm微孔滤膜滤过，置于容量瓶，甲醇定容至刻度线，即得逍遥丸供试品溶液；步骤2、逍遥丸对照品溶液的制备：分别精密称取甘草苷、芍药苷、绿原酸、异甘草素、甘草酸铵、甘草次酸、芍药内酯苷、白术内酯、藁本内酯对照品，加甲醇分别制成对照品原液，精密吸取上述各成分对照品，置于容量瓶中，即得混合对照品溶液；步骤3、对照品线性关系的建立步骤4、分别精密吸取按步骤1方法得到的逍遥丸供试品溶液和步骤2的混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；步骤5、将步骤3中获得的逍遥丸供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A；选择不同批次逍遥丸的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成逍遥丸的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。2.根据权利要求1所述的一种逍遥丸的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤1、逍遥丸供试品溶液的制备方法为：取逍遥丸样品适量，研细，粉末过50目筛，约1g，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，浸渍30min后超声处理30min，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，经0.45µm微孔滤膜滤过，置于10mL容量瓶，甲醇定容至刻度线，即得逍遥丸供试品溶液。3.根据权利要求1所述的一种逍遥丸的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤2、混合对照品溶液的制备方法为：分别精密称取甘草苷、芍药苷、绿原酸、异甘草素、甘草酸铵、甘草次酸、芍药内酯苷、白术内酯和藁本内酯对照品，加甲醇分别制成浓度为3mg/ml的对照品原液；精密吸取上述各对照品原液各100µL，置于10mL容量瓶中，加甲醇定容，即得混合对照品溶液。4.根据权利要求1所述的一种逍遥丸的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤4、高效液相色谱仪检测的色谱条件为：色谱柱：YMC－PackODS－A，规格250mm×4.6mm，5µm；流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液；梯度洗脱：0.01～5min，5%乙腈；5～15min，5%～15%乙腈；15～45min，15%～35%乙腈；45～63min，35%～70%乙腈；63～75min，70%～76%乙腈；75～87min，76%～100%乙腈；体积流量为0.8ml/min；柱温30℃；进样量为10µL；检测波长为254nm。5.根据权利要求1所述的一种逍遥丸的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤3线性关系建立为：精密吸取步骤（2）的混合对照品溶液2mL，1.5mL，1mL，0.5mL，0.2mL，0.1mL分别置于2mL量瓶中，用甲醇定容，即得不同梯度的混合对照品溶液，依次注入高效液相色谱仪；分别以对照品的峰面积Y和浓度X建立九个成分的线性回归方程；其中，绿原酸线性回归方程为Y=1E+07X+151750，r=0.9999；芍药内酯苷线性回归方程为Y=928150X+243140，r=0.9997；芍药苷线性