改进菊花中绿原酸含量的测定方法(精).doc

改进菊花中绿原酸含量的测定方法【关键词】菊花；,,高效液相色谱；,,绿原酸摘要：目的对菊花中绿原酸含量的测定方法进行改进。方法采用高效液相色谱（HPLC）法测定绿原酸含量。结果菊花中绿原酸的含量按《中国药典》2005年版Ⅰ部方法实验，样品提取方法复杂，含量有损失，误差较大。结论将含量测定方法改进后，具有样品溶液提取方法简便、含量准确可靠、分离效果好、灵敏度高、稳定性好等优点，为标准的修订提供可行的依据。关键词：菊花；高效液相色谱；绿原酸菊花为菊科植物菊ChrysanthemummorifoliumRamat.的干燥头状花序。药材按产地和加工方法不同，分为“亳菊”“滁菊”“贡菊”“杭菊”。本文分别对亳菊和杭菊进行了含量分析，改进后的方法（第2法）具有样品溶液提取方法简便、含量准确可靠等优特点。1器材氯仿、磷酸均为分析纯；甲醇、乙腈均为色谱纯；Agilent1100HPLC化学工作站；MettlerAE240电子天平；样品由湖北省宜昌市众生医药公司和湖北省红安县中医医院提供，经宜昌市药品检验所鉴定为“杭菊”，湖北某企业提供的菊花经鉴定为“亳菊”；绿原酸对照品（由中检所提供，供含量测定用，批号为110753200212）。2方法与结果2.1第1法按《中国药典》2005年版Ⅰ部方法实验。2.1.1色谱分析条件色谱柱为NucleosilC18(10μm,4.6mm×250mm)；柱温25℃；流动相：0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液［取磷酸二氢钠（NaH2PO4・2H2O）15.6g，加水至1000ml，制成0.1mol/L的溶液，加入磷酸适量，使pH值为2.7］甲醇（70∶30）；检测波长328nm；进样量20μl；流速1.0ml/min；AUFS=0.12s。2.1.2对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加水制成每毫升含0.1mg的溶液，即得（10℃以下保存）。2.1.3供试品溶液的制备取样品粉末（过1号筛）约1g［同时另取样品粉末测定水分（附录ⅨH第1法）］，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流2h，冷却，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加氯仿5ml，浸渍3min，弃去氯仿液，残渣挥去氯仿，加水适量使溶解，并转移至5ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得（应于当日测定）。2.2第2法（改进后的方法）2.2.1色谱分析条件流动相：乙腈0.4%磷酸溶液（12∶88），其余同第1法。2.2.2对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含0.1mg的溶液，即得（10℃以下保存）。2.2.3供试品溶液的制备取样品粉末约0.5g［同时另取样品粉末测定水分（附录ⅨH第1法）］，精密称定，置锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。2.3系统适应性实验2.3.1第1法按《中国药典》2005年版Ⅰ部方法实验。理论板数：本文依法对样品和对照品进行了处理，并按上述条件进行色谱测定，其理论板数为4495，符合《中国药典》规定。重复性实验：取新配制的绿原酸对照品溶液，进样5次，所得峰面积积分值为5753，5748，5747，5750，5747，RSD=0.04%(n=5)。2.3.2第2法（改进后的方法）理论板数：本文依法对样品和对照品进行了处理，并按上述条件进行色谱测定，其理论板数为5241，符合药典规定。重复性实验：取新配制的绿原酸对照品溶液，进样5次，所得峰面积积分值为5908，5891，5893，5889，5885，RSD=0.15%(n=5)。2.4样品测定结果2.4.1第1法将样品依法处理。结果见表1。