薄层色谱法的发展.doc

薄层色谱分析法的应用和发展一、薄层色谱分析在层析分离过程中的应用生物技术、新型材料技术、信息技术是当今科技发展的前沿,在某种程度上甚至可以代表一个国家的科学技术发展水平。层析分离过程是生化产物分离和纯化的重要手段之一,作为生物技术产业化进程中的“下游技术”往往成为技术和经济的关键,直接关系到产品的产量和质量,其成本经常占到总成本的60%～90%[2]。因此,层析分离过程的优化和控制就显得十分重要。薄层色谱分析方法,因其具有分析迅速快、成本低廉、可现场操作等特点在层析分离过程中不可缺少。1.薄层色谱分析的优越性薄层色谱分析方法和高效液相色谱分析方法均遵循层析分离的基本原理,因此,层析分离过程的中间控制性分析和分离后的最终产物的检验,用上述两种分析方法是非常适合的。高效液相色谱分析方法的精度高、分离效能高、选择性高、检测器灵敏度高,比较适合最终产物的检验。虽然高效液相色谱也可用于中控分析,但是分析检验的成本非常高，需要设置专业人员进行分析操作。由于样品在分析前需要预处理,得到分析结果的时间相对较长,对于层析过程的中间控制就显得不够及时,同时过高的分析精度也没有必要。薄层色谱分析方法在对层析分离过程控制性分析中就显示出了很高的优越性。2.薄层色谱片的制作和分析操作用于层析分离过程的中间控制性分析的薄层色谱片可以在专业试剂商店买到,如果在实验室自己制备则可节约80%的成本,同时可以根据分析的实际需要灵活地调整固定相薄层的配方。固定相通常用GF254硅胶和一定比例的纤维素配合而成。将固定相的浆料均匀地涂布在毛玻璃片上，经烘干活化后即可使用。每片薄层可以分析多个样品，重复使用几次。经毛细管点样、在层析缸用展开剂展开后，在紫外分析仪上可观察到非常清晰的分析结果，一次分析过程基本可控制在10min左右，现场操作人员经短时间的培训就可掌握。3.薄层色谱分析对层析分离过程的优化应用薄层色谱进行层析中间控制分析，选用展开剂和确定不同展开剂的比例是薄层分析的关键。展开剂的确定一般需要以下几个前提条件：（1）层析前的样品要经过高效液相色谱分析，获得较高的分离度。（2）确定样品中各组份的组成，明确层析分离要得到的主产物。（3）层析分离过程的操作方法及洗脱剂的配比要基本确定,各组份的洗脱次序要明确。（4）层析分离要得到主产物的纯度要规定一个在工艺上比较合理的范围（关系到最终的收率和产品质量）。（5）层析分离后的主产物和副产物要经过高效液相色谱分析，确定产物的含量。其中（1）和（2）通常也是必不可少的工艺条件，可以和薄层色谱分析结果相互印证。在上述前提条件具备后，可以根据样品的理化性质，选用几组常用的展开剂，分别用层析前和层析后的样品进行试验。选定一组分离效果较好的再进行微调,以围绕主产物能获得一个较好的分离度为准。所获得的分离度并非越高越好,因为通常情况下最初确定的层析分离过程本身为薄层分析提供了足够的时间和组份之间的空间。我们利用薄层分析方法对层析过程进行监控的另一个很重要的一个目的在于，减少这种时间和空间，从而缩短层析分离过程的时间、降低洗脱剂的用量，扩大最终产品的利用空间。薄层分析的这种作用在产品试制和工艺放大过程中是非常显著。例如:用硅胶层析柱（Φ40×400）分离一种新型高效生物农药（各组份分子量在800～1000之间）小试产品时，用自制的薄层片对层析过程进行控制性分析，并进一步优化层析过程。最终使层析时间缩短了20%，洗脱溶剂乙醇、乙酸乙酯的用量分别减少了10%和15%。层析分离过程中应注意的问题层析分离操作中,层析柱制备好后一般都要多次使用，层析柱的承载能力和分离效能是逐渐下降的。在层析操作方法和薄层分析方法确定下来后，要注意分析频次只能做一个基本的规定。因为同一批制备的层析柱，在使用过程中分离能力的衰减速度往往是不同的，不排除某一个柱子突然失效的可能。所以在薄层分析中要注意这一点，根据实际情况调整分析频次，工艺人员也要有相应的预案。薄层分析结果与高效液相色谱分析结果对照时，要注意两种方法所采用固定相的差异，确定好各组份的次序。5.结论薄层色谱分析方法对层析分离过程的控制性分析和优化作用是十分显著的。近年来，随着生物制品的研制和中药制剂的开发，薄层色谱分析方法作为一种快速、高效、简便、低成本的分析方法，将有更加广阔的应用前景。二、薄层色谱分析法在药物分析中应用进展薄层色谱法(TLC)是将供试品溶液点样于薄层板上，经展开，检视所得的色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比，用于药品的鉴别或杂质检查的方法。TLC是一种快速、灵敏、高效地分离微量物质的方法，是最简单的色谱技术之一，具有操作方便、备简单、离效率高、属性好、分析速度快、色谱参数易调整等特点，在药物分析中应用广泛。1药品真伪鉴别1.1化学药品及其复方制剂阿片中含生物碱20余种,其含量差