相思树悬浮细胞培养及其细胞形态学观察.docx

相思树悬浮细胞培养及其细胞形态学观察摘要试验分析了基因型、愈伤组织类型、2，4-D浓度、蔗糖浓度，起始接种量等各因素对相思树悬浮细胞培养的影响。结果表明：选择淡黄色，质地鲜嫩松脆的愈伤组织作为相思树悬浮培养的材料，能较快地建立起悬浮细胞系。黑木相思细胞小，胚性强，分散性好，最容易建立起悬浮细胞系。当蔗糖浓度为30g/L，2，4-D浓度为0.5mg/L时，适宜于悬浮细胞的保持。起始接种量对相思悬浮细胞系生长也有很大影响，从保持悬浮细胞系的角度看，每瓶25mL培养基中适宜的接种量为0.5～1.0g。台湾相思悬浮细胞培养周期以7d继代1次，卷荚相思悬浮细胞培养周期以8～10d为宜。同时，通过对悬浮细胞培养的显微观察可以看出不同基因型的相思树悬浮细胞，其细胞生长状态各不相同。关键词相思树；悬浮细胞；细胞学观察中图分类号S687；Q813.1文献标识码AAbstractTheeffectsofdifferentgenotypes，callustypes，concentrationsof2，4-D，sucroseconcentrations，andinoculationamountonthecellsuspensionculturewereanalyzedintheexperiment.TheresultsshowedthatthebestinitialmaterialoftheAcaciaspp.forcellsuspensionculturewasthefreshyellow，looseandsoftcallusIIandⅢ，whichwerepropitioustoestablishthesuspensioncellculturesystemquickly.Inaddition，thecellsoftheA.melanoxylonweresmall，ofstrongembryogeniccharacteristicsandfinedispersion，whichwereeasytoestablishthecellsuspensionsystem.Thecellsuspensioncouldbemaintainedwellundertheconditionsthatthesucroseconcentrationwas30g/Landthe2，4-Dconcentrationwas0.5mg/L.Andtheinitialinoculationamountalsoinfluencedthecultureofcellsuspension，ofwhichthebestinoculationamountwas0.5-1.0gin25mLcallieachbottle.Thesuitablesubculturecycleofthecellsuspensionculturewas7dinA.confusa，while8-10dinA.concinnata.Bythehistologicalobservation，itshowedthatthereweredifferentcellgrowthindifferentgenotypes.KeywordsAcaciaspp.；cellsuspension；histologicalobservationDOI10.3969/j.issn.1000-2561.2022.09.016相思树是中国引种的重要速生树种，在中国南方短周期工业原料林发展、水土保持和丰富林木种质资源等方面具有重要作用和地位[1]。植物细胞悬浮培养是植物细胞生长的微生物化，由于其分散性好，细胞形状及细胞团大小大致相同，而且生长迅速，重复性好，易于控制等有利因素[2]，因此被广泛用于细胞学、生物化学、生理学、发育生物学、遗传学、分子生物学的研究。悬浮单细胞或小细胞团不仅可直接进行遗传转化、原生质体分离、体细胞杂交等的研究，还可用于生产次生代谢物以及筛选细胞突变体等，因此悬浮细胞已经成为植物生物技术中一个最有用的工具之一[3]。本实验室林珊珊[4]、姬明[5]分別对台湾相思和黑木相思的悬浮细胞系的建立和保持做了研究，叶玲娟[6]研究了相思树的细胞培养及其体胚发生，黄敬文等[7-8]利用黑荆树悬浮细胞进行低温驯化，Vengadesan等[9]建立了藤金合欢的悬浮细胞系并通过体胚发生方式获得再生植株，Arumugam等[10]利用台湾相思悬浮细胞系进行了诱导子对抗氧剂诱导的影响，Hustache等[11]建立了阿拉伯胶树的悬浮细胞系。同时，Gantait等[12]和Vengadesan等[13]对相思树的组织培养与快繁应用做了比较详细的评述。本文以台湾相思（Acacia.confusa）、卷荚相思（A.concinnata）及黑木相思（A.mel