大蒜辣素致肝癌细胞HepG2凋亡研究.docx

大蒜辣素致肝癌细胞HepG2凋亡研究【摘要】目的研究大蒜辣素导致肝癌细胞HepG2凋亡的现象及其影响规律。方法运用CCK－8试剂盒研究Allicin对HepG2细胞增殖的影响，运用流式细胞仪检测其对细胞凋亡、DNA代谢的影响，运用免疫印迹研究肝癌细胞凋亡基因表达的影响。结果Allicin能抑制HepG2细胞的增殖，细胞倍增时间延长为4d，同时Allicin也能导致细胞出现大量凋亡，实验结果表明其凋亡率最高为％，死亡率达到%。细胞周期实验结果表明Allicin能使大部分细胞处于DNA合成期的S期及G0/G1期，延缓细胞增殖。Westernblot实验结果表明Allicin能激活细胞凋亡基因提高药物的治疗效果。结论Allicin能抑制肝癌细胞的增殖可导致细胞大量死亡并引起细胞凋亡，并能引起细胞DNA代谢发生紊乱，细胞大部分被阻滞在DNA合成的G0/G1期，细胞分裂被抑制，Westernblot实验结果表明细胞凋亡基因大量表达，细胞发生凋亡。【关键词】大蒜辣素；生长曲线；凋亡；DNA周期；HepG2肝癌细胞；Westernblot；免疫印迹Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofapoptosisonheptomacelllinesHepG2causedbyallicin.MethodsCCK-8wasexertedtoinvestigatetheproliferationoftheHepG2cellandcytometrymachinewasusedtodetecttheapoptosisandmortalityrate,finallywesternblotmethodwasusedtostudytheapoptosisprotnexpression.ResultsExperimentalresultsshowedthatallicincouldinhibittheproliferationofcellsandcausethecellapoptosisanddeath,andthehighestratioofapoptosisanddeathwere%and%,respectively.CellcycleexperimentalresultsindicatedthattheDNAmetabolismwasdisturbanceandmostofthemwereblockedinG0/G1periodresultingincellsmitosiswereblockedtoo.WesternblotresultsshowedthatallicintheactivedapoptosisgeneofcaninhibittheHepG2cellproliferationandcausecelldeathandapoptosis,furthermoreAllicincancausecellDNAmetabolismblotexperimentsresultsshowthattheapoptosisgenecanincreaseexpression.Keywords：Allicin;Proliferationcurve;Apoptosis;Cellcycle;Westernblot;HepG2大蒜辣素(Allicin)是新鲜大蒜(garlic)有效成分提取物，分子式为C6H10OS2［1～3］。研究表明，Allicin可以降低血清胆固醇和甘油三酯水平，减少动脉粥样硬化的形成以及血小板的凝集，同时还具有抑制微生物的作用，可以抑制癌细胞增殖及诱导癌细胞的凋亡，并表现出了肿瘤杀灭作用。已有Allicin对癌细胞生物效应的研究主要集中在胃癌及肠癌等的研究［4］，对肝癌的研究甚少。本文即研究Allicin对人肝癌细胞HepG2的增殖及凋亡的影响，通过探讨细胞DNA代谢紊乱及凋亡基因表达进行分子学水平的机理探讨。1材料及试剂UV2550型紫外分光光度计，Waters2996高效液相色谱仪，Empower数据处理，细胞培养箱为美国Thermo公司产品，流式细胞仪购自美国BD公司。HepG2人肝癌细胞购自中国科学院上海细胞库，胰蛋白酶、高糖DMEM培养基、胎牛血清(Fetalbovineserum,FBS)购自Gibco公司，二甲基亚砜(DimethylSulfoxide,DMSO)购自美国Sigma公司，青霉素、链霉素为杭州四季青公司产品，大蒜辣素由江苏省药品检验所提供。CCK-8试剂盒为日本同仁化学研究所产品，试剂盒编号WN717，细胞凋亡及周期试剂试剂盒均为流式细胞仪用购自美国BD公司，Westernblot试剂盒购自英国abCam公司。2方法细胞培养HepG2细胞培养培养条件为含10％FBS高糖DMEM培