大孔树脂纯化白芷总香豆素工艺研究.docx

大孔树脂纯化白芷总香豆素工艺研究【摘要】目的通过筛选实验，优化大孔树脂纯化白芷总香豆素的工艺。方法采用A，B，C3种大孔树脂对白芷提取液进行纯化，用紫外分光光度法测定白芷总香豆素含量，对工艺进行评价。结果A型树脂效果较好。最佳工艺：白芷提取液，动态吸附后，静置30min，用相当于原生药7倍量水，8倍量30%乙醇、8倍量80%乙醇以流速ml/min依次洗脱，收集80%乙醇洗脱液，回收乙醇，真空干燥得产物为黄棕色粉末。结论A型树脂适合分离纯化白芷总香豆素，优化后的纯化工艺稳定可行。【关键词】大孔树脂；白芷；总香豆素白芷药材原载于《神农本草经》，具有解表散风、通窍止痛、燥湿止带、消肿排脓之功效，主治外感风寒所致头痛、鼻渊、带下过多、疮痈肿毒等证［1］。现代药理研究表明，白芷主要活性成分为总香豆素类，具有解热镇痛、抗炎、解痉、降压、抗菌等作用［2］。本实验主要以总香豆素含量为指标，对大孔树脂的种类及相应纯化工艺进行筛选，为确定生产工艺参数提供依据。1器材UV-VIS8500紫外/可见分光光度仪；白芷；异欧前胡素对照品；试剂均为分析纯。2方法及结果提取液中白芷总香豆素含量的测定白芷乙醇提取液回收至无醇味，加水稀释后用醋酸乙酯萃取，萃取液蒸干，残渣加乙醇定容(相当于g药材/100ml)。以异欧前胡素为对照品，按《中国药典》2005版附录ⅤA紫外-分光光度法项下操作于311nm处测定。标准曲线方程为Y=1，R=0。白芷提取液纯化工艺优化研究上柱液的制备称取白芷药材200g，加6倍量70%乙醇渗漉，渗漉液回收至无醇味，加水定容至1000ml。树脂型号的筛选将白芷上柱液分别通过不同型号的的树脂，以总香豆素的比吸附量，解吸率，纯度为评价指标筛选树脂类型。结果见表1。表1树脂筛选结果树脂型号总香豆素比吸附量C/mg·g-1解吸率纯度比吸附量=/树脂重量解吸率=〔醇洗脱液中总香豆素量×100/〕×100%纯度=(醇洗脱液中总香豆素量×100/醇洗脱物干膏重量)×100%由表1可得,A型树脂纯化白芷总香豆素效果较好。A型树脂纯化白芷提取液的工艺研究上样浓度和吸附流速的考察以乙醇洗脱液中总香豆素含量为指标，通过单因素实验考察上样浓度和吸附流速对纯化工艺的影响。结果见表2～3。表2上样浓度考察结果表3吸附流速考察结果由表2～3可知，上样浓度为g生药/ml，吸附流速为ml/min效果较佳。水洗脱用量的考察水洗液进行molish反应和总香豆素含量检测，当收集到8倍量柱体积时，molish反应为阴性，且紫外311nm处无吸收，故确定水洗脱量为7倍量水。最大上样量的考察将浓度为生药/ml的白芷样品液通过树脂柱，分段收集残留液，测定总香豆素含量，结果见表4及图1。表4最大上样量考察结果泄漏百分数=(该流份的残留液中总香豆素量*100/该流份上柱液总香豆素量)×100%从泄漏曲线图可得：第8份残留液中总香豆素明显增多，说明上样至第7份时总香豆素开始明显泄漏，故确定白芷样品液的最大上样量为5g生药/g干树脂。洗脱剂种类的考察分段收集不同浓度乙醇洗脱液，稀释后测定吸光度，结果见表5，并绘制洗脱曲线，见图2。表5洗脱剂种类考察结果由洗脱曲线可知，80％乙醇解吸力较强，因此选其为洗脱剂；30%醇几乎不洗脱总香豆素，考虑作为除杂用。洗脱流速和洗脱剂用量考察以洗脱液中总香豆素量为指标，通过单因素实验考察洗脱流速和洗脱剂用量对纯化工艺的影响，结果见表6～7。表6洗脱流速考察表7洗脱剂用量考察由表6～7可知，洗脱流速为ml/min，洗脱剂用量为200ml效果较佳。小试取白芷药材粉末25g的渗漉液减压回收至无醇味，加水定容至250ml，置已处理好的A型大孔树脂，静态吸附30min，按ml/min的流速，以175ml水和200ml30%乙醇依次洗涤，弃洗涤液，再用200ml80%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，真空干燥得产物为黄棕色粉末。平行实验3份，结果见表8。表8小试结果经验证实验，RSD2%，优化工艺稳定可行。3讨论本实验中白芷总香豆素在树脂上的保留率偏低，后用液相色谱证明了总香豆素流失的原因是使用单一种类树脂纯化，因此考虑用混合树脂对其进行纯化，实验正在进行中。以30%乙醇除杂过程中，对乙醇用量没有进行考察，只是依据洗脱至无色进行判定，实际上可以结合乙醇洗脱液中的含量确定。【参考文献】［1］张廷模.中药学［M］.北京:高等教育出版社，2001：64.［2］郑虎占,董泽宏,佘靖，等.中药现代研究与应用［M］.北京:学苑出版社，1997：1151.