大孔树脂分离丹参酚酸B的筛选研究.docx

大孔树脂分离丹参酚酸B的筛选研究【关键词】丹酚酸B；高效液相色谱法；大孔树脂摘要：目的筛选分离丹酚酸B的最佳大孔树脂。方法以高效液相色谱测得丹酚酸B含量为指标，对10种不同型号的树脂分别进行吸附与解吸性能考察。结果大孔树脂的吸附与解吸性能有较大差异，HPD450，D101，X5，HPD800，D4020，HPD700对丹酚酸B均有较强的吸附与可洗脱性，D101为最佳吸附树脂。结论大孔树脂分离丹酚酸B方法是可行的。关键词：丹酚酸B；高效液相色谱法；大孔树脂丹酚酸是中药丹参SalviamiliiorrhizaBge.中的主要活性成分，具有抗动脉粥样硬化、保护心肌细胞、防心脑缺血损伤、抗血小板凝聚、抗肝纤维化、改善记忆、抗肿瘤等作用［1，2］。丹参药材中水溶性成分提取，多以丹参素或原儿茶醛为指标［3，4］，但两者在药材中的含量均较低，只有丹酚酸B为丹酚酸中最主要的有效成分［5］。目前对丹酚酸分离多采用醋酸乙酯萃取法，但该种方法溶剂消耗大，并存在溶剂残留。大孔树脂吸附是目前用于许多有效成分分离的良好方法，成本低、效率高，但至今尚无筛选大孔树脂分离丹酚酸B的报道。本人就大孔树脂对丹参酚酸B的吸附与解吸性能进行综合考察，以期找到一种分离丹参酚酸B的最佳大孔树脂。1材料与仪器1材料与试药丹参药材，湖北产，60℃减压干燥后，粉碎过40目筛。大孔树脂：HPD450、HPD600、HPD700、HPD800、D101、D4020、AB8、X5、S-8、NKA9。乙腈为色谱纯；甲醇、甲酸为分析醇；丹酚酸B对照品。2仪器分离色谱柱；Agilent1100高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱KromasilC18(250mm×mm)/5μm。2方法丹参提取液的制备丹参药材粉，加10倍量70%乙醇50℃浸提1h，过滤后滤渣再加8倍量70%乙醇50℃浸提30min，合并滤液，减压浓缩至原体积的1/3，用10%HCl调pH至，静置，离心去沉淀。保留上清液，并测定其中的丹酚酸B含量。大孔树脂吸附各种大孔树脂经乙醇、5%盐酸和5%氢氧化钠顺序浸泡3~5h后，以水洗至pH中性。量取丹参提取液100ml各10份，分别加入HPD450，HPD600，HPD700，HPD800，D101，D4020，AB8，X5，S8，NKA9树脂10g，静态吸附24h。过滤，滤液测定丹酚酸B含量，计算吸附率。树脂解吸吸附后的树脂，分别用水、30%，50%，70%乙醇各100ml淋洗，收集淋洗液，测定丹酚酸B含量，计算各溶液解吸率。解吸率为解吸量占吸附量的百分率。丹酚酸B的含量测定采用高效液相色谱法。流动相：乙腈∶甲醇∶水∶甲酸，柱温30℃,进样量10μl，流速1ml・min1，运行时间20min，检测波长276nm。丹酚酸B的保留时间为min，分离度大于，理论塔板数不低于5000。.标准曲线制备精密称定丹酚酸B对照品23mg，水溶解并定容50ml。分别吸取对照液0，，，，，5，10ml，加水定容至10ml，分别得到0，4，8，5，，，mg・ml1对照液梯度，进样高效液相色谱仪。以峰面积X为横坐标，浓度Y为纵坐标，绘制标准曲线。Y=106X+464，r=9。表明丹酚酸B在0~mg・ml1范围内具有良好的线性关系。样品测定吸取样液2ml，加水溶解并定容至100ml。过滤，滤液过μm微孔滤膜，进样高效液相色谱仪，按标准曲线制作方法测定峰面积，计算样液的丹酚酸B含量。3结果各种树脂对丹酚酸B的吸附性能比较经测定，丹参提取液的丹酚酸浓度为mg・ml1，各种树脂对其均有吸附，吸附率均在70%以上。在所试树脂中，除AB8和NKA9外，其它均表现良好的吸附性，吸附率大于90%。结果见表1。吸附能力排序为：D101S-8HPD700HPD450HPD800X5D4020HPD600AB8NKA9。表1不同树脂对丹酚酸B的吸附与解吸率各种树脂的解吸性能S8和NKA9树脂在低醇洗脱液下即解吸大部分，而其它树脂较少解吸，只有提高乙醇浓度50%以上才有较多的解吸。总解吸率排序为：HPD450D101X5HPD800D4020HPD700HPD600AB8NKA-9S8。各种树脂对于解吸所需醇浓度有较大差异，如D101和HPD450在50%以上才有较大解吸，而D4020在50%醇浓度以下即有较大解吸。综合解吸与吸附能力，除HPD600，AB8，NKA9，S8外，其它均可作为丹酚酸B的分离用树脂，D101为最佳吸附与解吸树脂。4讨论大孔树脂法作为分离丹酚酸B的方法是方便可行的，通过吸附可将提取液中的酚酸B富集，通过不同浓度醇洗脱，可得到不同纯度的丹酚酸B产品。由于树脂可再生，因而可反复使用，故而是分离丹酚酸B的良好方法。本实验对丹酚酸B的吸附和解吸进行了静态考察，通过吸附解吸，筛选出适合的树脂。但为了结合生产，采用