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大孔吸附树脂比色法测定柴胡口服液中总皂苷的含量【摘要】目的进一步完善柴胡口服液的质量标准，建立该制剂中总皂苷的含量测定方法。方法样品中的柴胡皂苷经大孔吸附树脂富集后，以柴胡皂苷a为对照品，采用对二甲氨基苯甲醛磷酸法显色，于545nm波长处测定总皂苷的含量。结果柴胡皂苷a在～μg·ml-1范围内与吸光度有良好线性关系，r=6，平均加样回收率为%，RSD=%。结论该方法稳定、准确、可靠，可作为柴胡口服液中皂苷类成分的质量控制方法。【关键词】柴胡口服液柴胡总皂苷大孔吸附树脂比色法柴胡口服液为柴胡药材经加工而制成的单味药制剂，具有退热解表之功效，用于外感发热，症见身热面赤、头痛身楚、口干而渴［1］等，其主要成分为柴胡皂苷和挥发油。2005版《中国药典》中的柴胡口服液质量标准对该制剂中挥发油的含量进行了规定，而对另外一类有效成分——柴胡总皂苷仅进行了定性鉴别，这与柴胡总皂苷类成分具有解热、抗炎、抗病毒、调节内分泌及免疫系统等重要药理作用的事实极不相符［2］。同时，柴胡口服液中总皂苷的含量测定方法还未见报道。因此，柴胡口服液中皂苷类成分定量方法的建立，对于完善其质量标准，更好地控制制剂质量，提高制剂的安全性和有效性均具有重要意义。基于此，本文以柴胡口服液为研究对象，首次采用大孔吸附树脂-比色法建立其中总皂苷类成分含量测定的方法。现报道如下。1仪器与试药仪器UV2501PC型紫外可见分光光度计，METTLERAE240型电子分析天平，RE52AA型旋转蒸发仪。试药柴胡口服液，柴胡皂苷a对照品，AB8型大孔吸附树脂，无水乙醇、磷酸、氢氧化钠、对二甲氨基苯甲醛均为分析纯。2方法与结果对照品溶液的制备称取柴胡皂苷a对照品4mg，置于10ml量瓶中，精密称定，加适量甲醇，超声溶解，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备［3，4］精密移取柴胡口服液3ml，上样于装有10ml已经处理好的AB8大孔吸附树脂的层析柱，进行动态吸附。待吸附完毕后，用质量-体积分数为5％的氢氧化钠水溶液洗脱至近无色，再用蒸馏水洗脱至中性，接着用体积分数为30％的乙醇洗脱至近无色，最后用体积分数为95％的乙醇50ml进行洗脱，收集该部分洗脱液并浓缩蒸干，再用体积分数为50％的乙醇ml定量转移至10ml具塞玻璃试管中，即得供试品溶液。测定波长的选择精密吸取对照品溶液及供试品溶液各ml，分别置于不同10ml具塞玻璃刻度试管中，加质量-体积分数为%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液ml，于70℃水浴中加热10min，然后取出放置至室温，加磷酸ml，摇匀，再置于70℃水浴中加热5min，放置至室温。在400～800nm进行扫描。结果显示：标准品及样品均在545nm处有最大吸收峰，故最终确定测定波长为545nm。线性关系考察精密吸取“”中对照品溶液，，，，，，ml，分别置于不同10ml具塞玻璃刻度试管，按照“”项下，从“分别加质量体积分数为%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液ml，”开始，依法显色，于545nm处测定吸光度。以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标进行线性回归，得回归方程A=2C+9。结果表明，柴胡皂苷a在～μg·ml-1浓度范围内与其吸光度呈良好线性关系。精密度实验精密吸取同一供试品溶液ml，依法显色后，于545nm处测定吸光度值，连续测定5次，RSD为%，表明仪器精密度良好。加热时间及稳定性实验取同一批号样品5份，每份3ml，按照“”项下方法制备供试品溶液5份，分别置于不同10ml具塞刻度试管中，加质量体积分数为%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液ml，摇匀，置于70℃水浴，加热10min，取出放置至室温，加磷酸ml，摇匀，再于70℃水浴中加热不同时间，取出后放置至室温，分别于5，10，30，60，90，120min时间点处测定其吸光度。结果表明，加热5min时样品吸光度值已达到最大，且样品显色后2h内基本稳定，RSD为%。重复性实验取同一批号样品6份，每份ml，按照“”项下方法，制备供试品溶液，依法显色，采用外标两点法计算各供试品中总皂苷的含量。结果得总皂苷含量的平均值为μg·ml-1，RSD为%，表明重复性良好。加样回收率实验精密吸取“”项下同一批号的柴胡口服液9份，每份ml，分别精密加入适量柴胡皂苷a对照品，依法制备样品、显色、测定含量，并计算回收率。结果见表1。表1回收率实验结果样品含量测定取河南天方药业生产的柴胡口服液3批，批号分别为：070901，071004，071101，每批3份，每份ml，依法制备供试品溶液，显色，并测定含量。结果见表2。表2柴胡口服液中总皂苷含量测定结果3讨论柴胡皂苷是柴胡中的主要活性物质，也是柴胡口服液发挥药效的主要成分，由于柴胡口服液中其它成分对含量测定的干扰，无法直接用比色法对其皂苷类成分进行测定，经过试验发现采用大孔吸附树脂柱层析