坎地沙坦对豚鼠心房肌细胞钾通道电流的影响.docx

坎地沙坦对豚鼠心房肌细胞钾通道电流的影响【摘要】目的研究坎地沙坦对正常豚鼠心房肌细胞内向整流钾电流(Ik1)和延迟整流钾电流(Ik)的影响，旨在为临床上应用坎地沙坦预防房颤发作和复发提供理论依据。方法酶解法分离豚鼠单个心房肌细胞，应用全细胞膜片嵌技术，在不同嵌制条件下，记录并分析坎地沙坦对豚鼠单个心房肌细胞Ik1及Ik的影响。结果坎地沙坦对IK1无影响，但可明显抑制Ik。结论坎地沙坦抑制Ik，使动作电位时程(APD)和有效不应期(ERP)延长，改善房颤电重构及它的现在已明确的抑制结构重构的作用共同参与房颤发作和复发预防的机制。【关键词】坎地沙坦；豚鼠；心房肌细胞；钾通道；膜片嵌技术【Abstract】ObjectiveTostudytheefectsofcandesatanondelayedrectifierK+currentandinwardcurrentk+currentinguineapigcardiacatriumWhole-cellpatch-clamptechniquewasCandesatanhadnoeffectsonIk1Ikwasinhibitedbycandesatan(from0．95±0．04pA/pFto0．45±0．03)pA/pF,n=5,P0．05).ConclusionCandesataninhibitingIkmightbegoodnesstoblockingelectricalremodelinginatrialfibrillation.【Keywords】Candesatan；Guineapigs；Cardiacatriummyocytes；Potassiumchannels；Patchclamptechniques血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)诞生于上世纪九十年代，一直以来，被广泛应用于高血压治疗及相关靶器官的保护，目前一系列临床实验结果均提示血管紧张素II受体拮抗剂可预防房颤的发生和复发[1，2]，但具体机制尚不清楚。有研究报道，血管紧张素Ⅱ对心肌细胞的电生理作用是通过受体影响离子通道活性而实现的，坎地沙坦是一种选择性血管紧张素Ⅱ亚型I受体(AT1)阻断药，本研究采用膜片钳全细胞记录方法观察它对延迟整流钾通道电流(Ik)及对内向整流钾通道电流(IK1)的影响,探讨坎地沙坦对心肌细胞电生理作用的机制，从而为坎地沙坦应用于临床预防房颤发生和复发提供理论依据。1材料与方法1．1实验动物健康成熟豚鼠，雌雄均可，体质量200~250g，由山东医科大学实验动物中心提供。1．2药品和试剂EGTA、HEPES购自Amresco公司，EGTANa2-ATP、小牛血清蛋白(BSA)为Sigma产品，胶原酶Ⅱ购于invitrogen公司，实验药物坎地沙坦纯粉由黄海制药厂惠赠，其余为国产分离纯。1．3液体组成(单位均为mmol/L)①正常台氏液：NaCl135，KCl5．4．HEPES10，NaH2PO40．33，MgCl21．0，CaCl21．8，葡萄糖10(用NaOH调pH至7．35~7．38);②无钙台氏液：NaCl135，KCl5．4．HEPES10，NaH2PO40．33，MgCl21．0,葡萄糖10(用NaOH调pH至7．35~7．38);③记录Ik的电极内液：KCl140，HEPES5，EGTA10，Na2-ATP2．0，MgCl21．0(用KOH调pH至7．3)；④记录Ik1的电极内液：KCl140，Na2ATP2．0，HEPES5．0，MgCl21．0，EGTA10(用KOH调pH至7．3);⑤记录钾电流的电极外液：NaCl135，KCl5．4，MgCl21．0,CaCl21．0，NaH2PO40．33，葡萄糖5．0，HEPES5．0．CaCl20．2(用KOH调PH至7．35~7．38)。1．4豚鼠单个心房肌细胞的分离采用Langendorff灌流酶解分离法。选健康成年豚鼠，腹腔注射3％戊巴比妥钠1mg/kg，并注射肝素200U/kg，麻醉约5~10min，仰卧位固定后，开胸暴露心脏,把4℃无钙台氏液滴在心脏上,以降低其氧耗。剪开心包,取出心脏,置于4℃无钙台氏液中,清洗并游离主动脉根部，然后迅速将心脏悬挂于Langendorff装置上用动脉夹固定，行主动脉逆行灌注，灌流速度为5~10ml/min，依次灌无钙台氏液、含0．03胶原酶(CollagenaseII．Sigma)的低钙(25μmol/L)台氏液、KB液。以无钙台氏液灌流5~7min后，换以含牛血清白蛋白(BSA，0．02%)和胶原酶(II型，0．02g/L)的低钙台氏液灌流2~5min。待心脏膨松变大，呈海绵状，心肌呈粉红色半透明，流出液为黏条状时，取下心脏，剪去心室，其他部分置于37℃的KB液中保