桂枝中抗过敏活性成分的研究.docx

桂枝中抗过敏活性成分的研究【摘要】目的跟踪确定中药桂枝中的抗过敏活性成分。方法桂枝通过70%乙醇溶液提取，不同有机溶剂萃取及大孔树脂HP-20、聚酰胺和SephadexLH-20对样品进行纯化，以透明质酸酶抑制率为指标对各组分抗过敏活性进行跟踪，确定抗过敏活性最强的组分，通过薄层层析、显色反应和光谱鉴定对抗过敏活性最强的组分定性。结果桂枝大孔树脂40%乙醇洗脱部分的酶抑制率为%，过聚酰胺40%丙酮洗脱部分酶抑制率达到73%，过凝胶甲醇洗脱后，活性成分酶抑制率最高达93%。结论桂枝中强过敏组分为缩合类单宁【关键词】桂枝；透明质酸酶；缩合类单宁Abstract：ObjectiveTotrackandascertaintheantiallergiccomponentsofRamuluswasextractedby70%ethanolandorganicsolventsbyturns,thenpurifiedbyDiaionHP-20,polyamideandSephadexthesametime,theantiallergicactivitywascarriedoutbymeasuringtheinhibitionrateonhyaluronidase.ThenthebestantiallergiccomponentswereascertainedbyTLC,colorreactionandspectrumcertification.ResultsTherateofRamulusCinnamomiextractpurifiedbyDiaionHP-20andelutedby40%ethanolwas%,purifiedbypolyamideandelutedby40%acetonewas73%，purifiedbySephadexLH-20andelutedbymethanolwas93%.ConclusionThebestantiallergiccomponentsofRamulusCinnamomiarecondensedtannins.Keywords：RamulusCinnamomi;Hyaluronidase;Condensedtannins近十几年来，随着物质生活水平的提高，环境社会因素的影响，过敏性疾病越来越多，其发病率不断上升。据统计过敏患者已占世界人口的40％。20％以上的美国人都曾受到过敏性疾病的困扰；日本厚生省过敏综合研究报告显示，35％的小儿和22％的成人都曾患过不同程度的花粉症、过敏性皮炎、哮喘、鼻炎等过敏性疾病；在我国，过敏反应的发病率约占10％，且呈逐年上升的趋势。根据免疫反应机理，过敏反应分为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅳ型，大多数过敏反应是与体内透明质酸酶活性有关的Ⅰ型过敏反应［1］。目前，世界各国治疗过敏反应的药物都存在毒副作用大的缺点，从天然植物中提取抗过敏的活性成分，因具有低毒高效的作用效果，越来越受到人们的青睐，可作为新型的食品添加剂和药物原料，用于保健食品和新药的研究开发。桂枝为樟科植物肉桂CinnamomumcassiaPres1的干燥嫩茎，临床上多用于缓和肠胃刺激、强心、改善微循环、抗炎、抗血小板凝集等［2］。桂枝在抗过敏方面的研究主要是桂枝汤合方或桂枝汤的应用。临床应用桂枝汤治疔过敏反应以及抑制炎症反应获得明显疗效。现代药理研究表明，桂枝对嗜异性抗体反应显示出抑制补体活性作用，故其有较强抗过敏作用［3］。国内外研究已证明桂枝具有抗过敏作用，但对桂枝的具体的抗过敏活性成分还鲜有报道。本文对桂枝的抗过敏活性成分进行了分离纯化和初步鉴定，以透明质酸酶抑制率为指标进行活性跟踪，为桂枝的进一步开发提供理论依据。1器材与方法1仪器与试剂桂枝：市售，产地为广西；试剂：大孔树脂HP-20，北京绿百草公司；聚酰胺，浙江台州市路桥四甲生化塑料厂；葡聚糖凝胶SephadexLH-20，Amershambioscisences公司；透明质酸酶、透明质酸钾，Simga公司；对二甲氨基苯甲醛，上海试剂二厂；乙酰丙酮：天津试剂厂；钨酸钠、磷钼酸、磷酸：南宁蓝天试剂有限公司；醋酸、石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇、乙醇等均为分析纯。仪器：RE-52A旋转蒸发仪；GSY-Ⅱ恒温水浴箱；UV-1601PC紫外分光光度计；LABCONCO真空冷冻干燥系统；XWT-S小型台式纪录仪；全自动点样仪。2抗过敏活性成分的提取和纯化桂枝有效成分的粗提取取桂枝样品粉碎，过20目筛，方案1用石油醚热回流提取3h，方案2用醋酸乙酯热回流提取3h，方案3为用70%乙醇溶液70℃提取1h。各方案分别重复提取3次，合并提取液，对3种粗提方案的提取液真空浓缩、冷冻干燥，分别得到样品桂1，桂2，桂3，分别对各样品进行透明质酸酶实验。桂枝粗提物的萃取分离将透明