重组表达质粒ppic9kmsbd1的构建本科学位论文.doc

本科毕业论文重组表达质粒pPIC9K-mSBD-1的构建There-constructionofpPIC9K-mSBD-1学院：兽医学院专业：动植物检疫姓名：郑佳琪学号：090115052指导教师：曹贵方职称：教授论文提交日期：二Ο一三年六月摘要研究发现，β-防御素主要由哺乳动物的皮肤、黏膜等上皮细胞产生，由38～42个氨基酸组成。其分子中带有较多正电荷，空间结构分为疏水区和带点区；折叠形成3束β-折叠片层结构，由6个保守的半胱氨酸残基形成3个二硫键稳定结构，由Cysl-Cys5、Cys2-Cys4、Cys3-Cys6相配对连接。二硫键可使小分子防御素紧密联结以防御蛋白酶水解，所以在富含蛋白的吞噬溶酶体环境中仍保持其特性。这也是防御素区别于其他抗微生物肽的主要因素。因其抗菌谱广且抗菌效率高，作用机制独特，不易产生抗性等特点，在抗生素抗药性日趋严重的情况下，抗菌肽极有可能成为新的抗生药物的来源。本实验基于实验室已经构建好的质粒PUC57-mSBD-1-T，利用PCR技术，扩增绵羊β-防御素1成熟肽（mSBD-1）基因。扩增出的mSBD-1因与T载体成功连接后，将其亚克隆到毕赤酵母表达载pPIC9K上，构建真核表达质粒pPIC9K-mSBD-1。关键词：防御素毕赤酵母pPIC9K质粒There-constructionofpPIC9K-mSBD-1AbstractIt’sfoundthatβ-defensinsismainlycomposedofmammalianskinandmucousmembraneepithelialcells,composedof38~42aminoacids.Becauseoftheirbroad-spectrumofantinicrobialactivityanddefenseagainstpositiveandnegativeGrams'bacteria,epiphyte,protozoanandenvelopedvirus,inadditionalβ-defensinshavedistinctiveantibacterialmechanism,andhardlyno-endurancetodrug,sotheresearchonβ-defensinshasbecomeahotspotintheworld.ThisexperimenbasesonthelaboratoryplasmidPUC57-mSBD-1-Twhichhasbeenbuilt,usingthePCRtechnologytoamplificatesheepmSBD-1gene.WiththeamplificatedmSBD-1andTcarriersuccessfullyconnected,puttheclonetocarryonpPIC9Kpichiaexpression.SoeukaryoticexpressionplasmidpPIC9K-mSBD-1isbuilt.KeyWords:defensinsPichia.pastorisplasmidpPIC9K目录TOC\o"1-3"\h\z\uHYPERLINK\l"_Toc358036508"1引言PAGEREF_Toc358036508\h1HYPERLINK\l"_Toc358036509"1.1动物防御素的概述PAGEREF_Toc358036509\h1HYPERLINK\l"_Toc358036510"1.2β-防御素PAGEREF_Toc358036510\h1HYPERLINK\l"_Toc358036511"1.3防御素的应用前景PAGEREF_Toc358036511\h2HYPERLINK\l"_Toc358036512"1.4毕赤酵母表达的优点PAGEREF_Toc358036512\h2HYPERLINK\l"_Toc358036513"1.5选取质粒pPIC9K的优点PAGEREF_Toc358036513\h3HYPERLINK\l"_Toc358036514"1.6研究内容PAGEREF_Toc358036514\h3HYPERLINK\l"_Toc358036515"1.7存在的问题PAGEREF_Toc358036515\h3HYPERLINK\l"_Toc358036516"2材料与方法PAGEREF_Toc358036516\h4HYPERLINK\l"_Toc358036517"2.1材料PAGEREF_Toc358036517\h4HYPERLINK\l"_Toc358036518"2.2方法PAGERE