《重组质粒构建》.ppt
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《重组质粒构建》.ppt
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重组质粒构建.pptx
DNA重组质粒的构建基因克隆genecloning应用酶学的方法,在体外将目的基因与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子(重组体),继而通过转化或转染宿主细菌或细胞、筛选出含有目的基因的转化子细菌或细胞,再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子拷贝。核心技术:DNA重组技术(recombinantDNAtechnique)基因克隆的基本程序:分—切—接—转—筛PCR酶切连接转化&转染抗性或标记筛选目的基因DNA片段的获得外源DNA分子与载体DNA分子的体外重组重组DNA分子转移到适当的受体菌或细胞
重组质粒的构建与转化.doc
../NUMPAGES7.实验目的学习在实现DNA体外重组过程中,正确选择合适的载体和限制性内切酶并能用限制性核酸内切酶对载体和目的DNA进行切割,产生利于连接的合适末端。学习设计构建重组DNA分子的基本方法,掌握载体和外源目的DNA酶切的操作。学习利用T4DNA连接酶把酶切后的载体片段和外源目的DNA片段连接起来,构建体外DNA分子的技术,了解并掌握几种常用的连接方式。掌握利用Cacl2制备感受态细胞的方法。学习掌握热击法转化E.coli的原理和方法。学习并掌握使用红白菌落法筛选获
重组质粒的构建经验~~~.docx
第PAGE\*Arabic\*MERGEFORMAT45页共NUMPAGES\*MERGEFORMAT45页重组质粒的构建经验~~~一、克隆基因的酶切位点问题1、克隆位点选择的问题。首先要对目标基因进行酶切位点扫描分析,列出其所含酶切位点清单。然后对照质粒多克隆位点,所选择的克隆位点必须是目标基因所不含的酶切位点。这是常识,不赘述。2、保护碱基数目的问题。在设计pcr引物时,引入酶切位点后,常常要加入保护碱基,这是大家所熟知的。但是保护碱基数量多少,可能被新手所忽视。这种忽视碰可能会大大影响后
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