不同诱导子对赤霞珠葡萄组培苗白藜芦醇含量及抗氧化酶活性的影响--毕业论文.docx

本研究以多年生酿酒葡萄赤霞珠的幼嫩茎段为外植体，以其培养出的组培苗为材料，通过添加灰葡萄孢诱导子和水杨酸，研究诱导子对赤霞珠葡萄组培苗中白藜芦醇合成及抗氧化酶活性的影响。主要研究结果如下：1.以赤霞珠葡萄新梢的半木质化茎段作为外植体材料，接种培养污染率低，外植体萌芽率高，萌芽率为96.5%；消毒溶液以0.1%升汞溶液消毒8min效果最好。2.继代培养和生根培养以1/2MS+IBA0.2mg•L-1+蔗糖20g•L-1培养基培养赤霞珠葡萄组培苗生长状况最好，成苗率为99.67%，生根率为99.67%。3.灰葡萄孢诱导子诱导赤霞珠组培苗，诱导9d的效果最好，可以使处理中白藜芦醇的含量比对照高近1.67倍；水杨酸诱导赤霞珠组培苗，诱导9d的效果最好，可以使白藜芦醇含量比对照高1.5倍。4.灰葡萄孢诱导子处理后赤霞珠组培苗中PAL、POD、SOD、CAT、PPO活性均大于对照，分别是对照的2.17、1.58、1.48、1.83、2.11倍。水杨酸处理后赤霞珠组培苗中PAL、POD、SOD、CAT、PPO活性均大于对照，分别是对照的1.37、1.13、1.23、1.03、2.19倍。5.综合分析得出，灰葡萄孢诱导子对赤霞珠组培苗白藜芦醇的促进效果比水杨酸好。关键词：赤霞珠，组培苗，白藜芦醇，抗氧化酶，灰葡萄孢，水杨酸第一章文献综述1.1葡萄快速繁殖体系的研究进展葡萄快繁体系的建立，主要应用茎尖、带芽茎段为材料进行繁殖，为再生体系的建立提供材料(叶片、叶柄和茎段等)，同时用于良种快繁、脱毒、种质交换和保存等方面[2-6]。1.1.1外植体的选择与处理尽管葡萄是最先进行离体培养的植物之一，但再生快繁技术到二十世纪七十年代才有报道。离体培养是将一小块植物组织切下来，与原来污染的植物器官分离，建立无菌体系。为了所选的无菌外植体在一开始时可以生存，就必须有非常强的生理适应能力，并渐渐适应。外植体增殖可以由茎段、茎尖以及具有分生能力的碎片组织得到。不同外植体对离体存活和芽分生能力有一定影响，顶端分生组织通常被认为是外植体微繁的最好选择，然而在葡萄上也有人报道腋芽比顶芽更利于存活与再生[7]。环境因素和母体生理状态对它有非常大的影响，一般温室生成的芽比大田苗成活率高，容易萌发的苗是健壮的、营养充足。得到成功无菌体系及降低污染的前提条件是适宜的原材料处理。把幼嫩葡萄带芽茎段从大田中取回，先用自来水冲洗多次，然后放在超净工作台上用70%酒精清洗30秒，用无菌水冲洗3-5次后，再用0.1%的升汞溶液消毒5-6分钟，接着用无菌水反复冲洗3-5次，然后把下部褐化的伤口切掉，得到长约2cm的茎段，接种到继代培养基上。接种几天后，免除产生的许多酚类物质分散在培养基中切除褐化部位，阻止离体继续生长[8，9,10]。1.1.2培养基和激素的选择选出最好的培养基是建立良好的葡萄繁殖体系和再生体系的主要工作之一。葡萄离体培养国内外一般使用MS、B5、NN等培养基较多，许多细胞分裂素和生长素，在葡萄快繁研究中基本都有应用[8-13]。第一类：富集元素平衡培养基该类的主要培养基是MS，其特点是：①营养丰富，不需再加入水解蛋白等有机成分；②微量元素种类较全，浓度较高。与MS相类似的培养基或称从MS改良后的培养基还有LS培养基、BL培养基、BM培养基及ER培养基等。第二类：硝酸钾含量较高的培养基这类培养基有B5、N6、SH等培养基。这类培养基的特点是：①按态氮的含量低(高铵对有些植物有抑制作用)；②含有较高的盐酸硫胺素。第三类：中等无机盐含量的培养基这类培养基有H、Nitsch、Miller和Blaydes培养基。其特点是：①大量元素无机盐约为MS的二分之一；②微量元素种类减少而含量增高。在植物中，生长素主要影响茎和节间伸长、向性、顶端优势、叶片脱落和生根等。在组织培养中，促进细胞分裂、诱导愈伤组织和生根等是它的主要功能，其中用于生根的主要有IBA和NAA，并能与细胞分裂素互作促进茎的增殖。细胞分裂素主要促进细胞分裂，改变顶端优势，促进芽的分化等。激素使用的关键是细胞分裂素与生长素的比例，根据培养的目的进行调节，原则是生长素浓度明显低于细胞分裂素，则促进细胞分化，反之促进细胞脱分化诱导愈伤组织。细胞分裂素与生长素的种类对不同植物的敏感性不同，因此激素种类的选择应以植物种类而宜。有些植物不能或很难得到芽的分化，这也许是因为没满足其分化的条件，如果破例使用一些不常用的激素或激素抑制物，如脱落酸、2，3，5-三碘苯甲酸(0.02mg/L)、7-氮-吲哚硝基苯酰溴(0.01-0.lmg/L)等，就有可能启动芽的分化。1.1.3增殖1978年BarlasS和Skene报道了葡萄试管苗快繁技术。1979年曹孜义等，在国内首次报道了葡萄试管繁殖技术，并于1980年建立了我国首个植物组织培养的葡